家禽的性腺发育有着其独特的规律，怎样从家禽最原始的性腺发育过程中开始研究其影响因素成为今天的热门研究课题。本文以雄性鸡胚性腺作为实验材料，类环境雌激素双酚A作为作用因子，在雄性鸡胚性腺发育的整个过程中通过双酚A的注射、石蜡切片的制作及染色、性腺组织DNA的提取、引物设计以及PCR扩增等实验方法，来探究双酚A对于雄性鸡胚性腺的发育影响。通过对鸡胚的性腺的形状、大小、以及DNA的甲基化表达程度的比较，得到双酚A在进入机体后，会抑制雄性鸡胚睾丸的形态发育使其变小，对其内部的精细管结构也会造成损伤。另外通过对其中内源性相关表达有关的Tet家族基因以及Dnmt家族基因进行检测，发现雄性鸡胚睾丸在经过双酚A处理后，睾丸中的Tet家族基因的表达量会下降，但是Dnmt家族基因的表达量则呈现上升。整个实验进一步探究了在雄性鸡胚性腺发育过程中双酚A的调控机制，对由于双酚A的暴露问题引起的有关雄性生殖系统疾病的分子机制进行更深一步的研究。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
1.引言 2
1.1双酚A的来源及问题 2
1.2双酚A对于性腺发育的影响方式 2
1.3研究意义 3
2 材料与方法 3
2．1 实验材料 3
2.1.1 实验样品 3
2.1.2实验试剂 3
2．2 实验方法 4
2.2.1双酚A注射鸡胚 4
2.2.2制作石蜡切片 4
2.2.3 HE染色 4
2.2.4总RNA提取 5
2.2.5引物设计 5
2.2.6 PCR扩增 6
2.2.7半定量分析 6
3 结果与分析 7
3．1性腺形态对比分析 7
3．2胚蛋比数据分析 7
3．3石蜡切片观察 8
3．4基因表达结果分析 9
3．5 TET基因家族在雄性鸡胚性腺中的表达情况 10
3．6 DNMT基因家族在雄性鸡胚性腺中的表达情况 10
4 讨论 11
4．1双酚A *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072* 
的环境雌激素效应 11
4．2 双酚A对于雄性鸡胚性腺发育上的影响 11
4．3 前景展望 11
致谢 12
参考文献： 12
双酚A对鸡胚雄性性腺发育的影响
动物科学 孙冬晖
引言
1.引言
禽类性腺的整个发育过程与脊椎动物有很大程度上的相似，都是由胚胎期开始，从最初形态上没有差异化的性腺组织逐步分化成有挺大差异的睾丸和卵巢组织。而在这整个性腺发育的全部过程中，性腺的生长又同时会受到多种因素的影响。而本实验通过双酚A作为作用因子，作用于不同发育时期的鸡胚中，观察研究在不同阶段的鸡胚性腺的发育变化，从而可以分析双酚A对于雄性鸡胚的影响，进一步探究有关双酚A对于雄性性腺发育影响的分子机制。
1.1双酚A的来源及问题
双酚A（Bisphenol A，BPA）的化学结构和雌激素结构类似，是环境内分泌干扰物（EDC）的一种，具有弱雌激素的活性。它的实质是一种化学物质，它的化学名称为2,2二（4羟基苯基）丙烷，是生产聚碳酸酯以及环氧树脂等塑料制品的重要中间体物质，在当今社会，双酚A（BPA）已然成为世界上每年生产使用量最多的化学性制品之一。每年人类有关BPA生产制造的总量高达60亿英镑[1]。随着人类社会科技的不断进步以及发展需求，大量包含BPA的物质被反复使用，甚至放入高温环境中。这种使用方式包括作为食品包装容器或渗入食品饮料中的塑料薄膜等，直接导致了BPA的浸出，BPA也就很容易进入到人体当中[2]。国外人Davis曾经做了一个有关全世界男性生殖健康的调查研究，在收集了大量的数据后分析报道[3]，在1990年较1940年这几十年的时间中，人类的整个精子密度下降了约百分之五十，精液量也随之减少了百分之二十五。与这种下降相反的是，人类男性生殖系统异常发育问题的发病率增加了近1倍。在相关科学研究后分析表明，这种现象问题的发生与人类生活环境中不断暴露的环境雌激素有关，同时也进一步说明环境污染导致的双酚A暴露问题已然成为造成男性生育能力下降的主要因素之一。因此，越多越多有关环境雌激素的试验研究在被进行着。与此同时，还有人报道，在男性的睾丸中，生精细胞的大量凋亡有可能是由于双酚A（BPA）引起的，这就导致有关双酚A引起睾丸内相关基因蛋白表达量增加的这类关于环境雌激素对生殖细胞凋亡影响的研究报道越来越多，有关环境雌激素对于人类生活的影响问题也被越来越多的人所关注了解。但是不足的是，在现有的种种相关报道实验中，大多数的研究采用的主要都是在体内研究的方法，这种方法产生的直接影响就是有关于双酚A的研究有时会局限在整体和细胞的水平上。因此，在本文的实验中，我们换一种视角，以体外采用低、中及高剂量的BPA染毒，注射种蛋，来作为试验观察雄性鸡胚性腺的生长发育。以此来探究有关类环境激素暴露的同时，对于雄性性腺的生长发育上的影响机制。
1.2双酚A对于性腺发育的影响方式
双酚A是一种环境干扰物，其化学结构与雌激素类似。早在一九三六年，Dodds就通过皮下注射实验证明了双酚A的雌激素样活性作用[5]。然后到一九九三年，Krishman[6]报道了有关双酚A作用于哺乳动物时，在其体内的弱雌激素活性作用，这个报道拉开了一起研究双酚A暴露的科学热潮。从此后，双酚A的不断暴露对于人类环境和健康的影响引起整个科学界的广泛关注。在现有的研究结果中，知道BPA其本身具有弱的雌激素样活性作用，以及其较强的抗雄激素样作用。它的一个主要的毒理包括其可以在动物体内进行模拟或者抑制其内源性雌激素的作用，从而能产生拮抗内源性雌激素的效果。在体内干扰正常的机体内源性激素与雌激素受体的代谢合成，这样间接性改变内分泌与生殖系统的正常功能[78]。通过这样的一种干扰机制，双酚A在进入到体内之后可以对于整个的生殖系统产生影响，尤其是在雄性生殖系统内，其产生的危害更大。在国内外大量的有关双酚A影响机制的体外实验和动物实验的研究中，其结果均表明了双酚A本身具有着强烈的抗雄激素作用和弱雌激素样作用。在一些大型的动物模型中，能够观察到它可引起激素内分泌紊乱、生殖器官形态学和功能及性发育的紊乱[912]。
另外，在国内目前现有的研究中，发现低剂量的BPA可以通过干扰体内雌激素的合成来加强其对雌激素的拮抗作用[13]。此外，BPA还可以抑制雌激素的活性，或干扰雌激素结合受体的活性[14]。在之前的一些已完成研究中，其中大多数是关于高浓度的生物BPA对动物毒理方面的影响因子研究，而关于本文中实验用的低浓度的研究比较少。有关BPA的作用浓度实验研究，不能仅仅通过一系列体外实验浓度来确定，而要通过不同浓度对于动物本身生理作用来确定。在本实验中通过低浓度的BPA对不同时期的鸡胚的注射来观察形态的变化，进行初步判断BPA对于雄性性腺的影响。

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