为了研究光周期对公猪分泌睾酮（Testosterone, T）和皮质醇（Cortisol, Cor）的影响，试验比较了恒定长光照和恒定短光照对梅山小公猪粪便中T和Cor含量的发育性变化，通过细胞实验分析褪黑激素（Melatonin，MLT）对猪睾丸间质细胞增殖和类固醇激素分泌的影响。结果显示恒定长光照组公猪粪便中的T和Cor含量均高于恒定短光照组，0.1μM和1μM的MLT浓度显著促进猪睾丸间质细胞增殖，0.1μM MLT实验组的猪睾丸间质细胞T和Cor分泌量均显著降低，1μM MLT实验组则T分泌量显著增加而Cor分泌量无显著变化。研究表明适当浓度的MLT能提高公猪繁殖性能，这为建立公猪光照饲养体系提供理论基础。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言2
1材料与方法2
1.1主要材料与试剂 2
1.1.1材料 2
1.1.2仪器 2
1.1.3试剂配制 2
1.1.4酶联免疫检测（ELISA）试剂盒3
1.2动物试验分组及采样3
1.3 细胞培养3
1.3.1猪睾丸间质细胞的复苏与传代3
1.3.2褪黑激素处理猪睾丸间质细胞3
1.4类固醇激素的检测4
1.5数据统计4
2结果与分析4
2.1光周期对公猪分泌睾酮和皮质醇的影响4
2.2不同浓度褪黑激素对猪睾丸间质细胞增殖的影响5
2.3 褪黑激素对猪睾丸间质细胞分泌睾酮和皮质醇的影响6
3讨论6
致谢8
参考文献8
光照对公猪类固醇性激素分泌的影响
引言
引言 光周期是调节季节性繁殖动物繁殖性能的重要环境因素。根据鸡长日照繁殖特性，通过调控光周期调节其性成熟和产蛋时间、产蛋量，甚至蛋的大小[1,2]。虽然现代家猪通常被认为是非季节性繁殖动物，但其性腺大小、精液质量和性激素分泌都类似其祖先的短日照繁殖特性：繁殖活动在冬季和早春较为活跃，在夏季和初秋受到抑制[3,4]。Minton JE, et al *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072^ 
. (1985)[5]研究表明，渐增长光照条件下培育的公猪血液中睾酮（Testosterone, T）水平高于渐减短光照条件下生长的公猪。TabeckaŁonczyńska A, et al. (2015)[6]研究显示，猪睾丸中T含量呈现季节变化，12月最高，6月最低。Weiler U, et al. (1996)[7]研究显示，在自然条件下，公猪血浆中T含量在光照时间逐渐减短的10月和11月出现峰值，在光照时间逐渐增长的4月和5月则出现最低值。
褪黑激素（Melatonin, MLT）是松果体分泌的一种吲哚类激素，其分泌呈现昼夜节律：黑暗中分泌增加，光照中分泌降低[8]。Mukherjee A, et al. (2014)[9]研究表明，光周期可调节金仓鼠体内MLT的分泌。Tast A,et al. (2001)[10]研究表明，在春分、夏至、秋分和冬至四天中，欧洲野猪MLT分泌高峰分别持续10h、6h、11h和17h，家猪则分别为9h、8h、12h和11h。以上数据说明，光周期季节性变化可影响猪MLT的分泌，但家猪没有欧洲野猪受到的影响明显。这种与光周期高度契合的节律性提示MLT是沟通外界光照与动物机体生理的信号物质[11]。
Casao A, et al. (2010)[12]研究表明，非繁殖季节的山羊注射外源MLT可使山羊睾丸增大、血浆T升高、性欲增强。Deng SL,et al. (2018)[13]研究显示，向绵羊睾丸间质细胞和支持细胞共培养体系中加入107M MLT能够提高T分泌量，使用MLT受体阻断剂后T分泌量恢复。睾丸间质细胞和卵巢卵泡细胞膜被检测到和MLT高亲和率的MLT受体表达[8]，MLT通过褪黑激素膜受体1（Melatonin Receptor 1, MT1）介导调节睾丸间质细胞T的分泌[12]。以上分析说明，光周期可能通过调控MLT分泌，调节公猪分泌T。
在T的合成过程中，其前体物质17羟孕酮在21羟化酶的作用下生成皮质醇（Cortisol, Cor）。Yazawa H, et al. (1999)[14]关于大鼠的研究表明，血浆Cor的升高会加速睾丸生精细胞的凋亡，并造成精液品质的下降。Andersson H, et al. (2000)[15]研究表明，公猪在光照条件下Cor的分泌量多于在黑暗条件下Cor的分泌量，150lx渐增长光照条件（春季）饲养的公猪的Cor分泌量高于1500lx渐增长光照条件饲养的公猪的Cor分泌量。这说明光照不仅可以调节T的分泌也可以调节Cor的分泌。但MLT能否参与光照对Cor分泌的影响尚不清楚。为了阐明以上未知问题，本论文通过研究恒定长光照和恒定短光照对梅山公猪T和Cor分泌的影响，以及不同浓度MLT作用于睾丸间质细胞对其增殖及其分泌T和Cor的影响。
1 材料与方法
1．1 主要材料与试剂
1．1．1 材料
试验用断奶梅山公猪、睾丸间质细胞系，均由上海市农业科学院提供。
1．1．2 仪器
酶标仪（Thermo公司）、培养箱（Thermo公司）和冻干机（Christ公司）。
1．1．3 试剂配制
100%甲醇：无水甲醇（国药集团化学试剂有限公司）。
80%乙醇：双蒸水2:8稀释无水乙醇（国药集团化学试剂有限公司）。
PBS溶液：取8.0g氯化钠、0.2g氯化钾、1.44g磷酸氢钠、0.24g磷酸二氢钾溶于1L双蒸水中，用盐酸或氢氧化钠调节pH至7.07.2。
胰酶消化液：使用PBS溶液10倍稀释胰酶消化液（Trypsin，gibco公司）。
细胞培养液：15%胎牛血清（FBS，gibco公司）和85% 高糖培养基（DMEM high glucose，上海素尔生物科技公司），每500mL含5mL青链霉素混合液（gibco公司），现配现用。

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