本试验旨在通过体外静态模拟瘤胃发酵法来研究不同来源及浓度缓释尿素对瘤胃发酵参数的影响。试验分2个水平，目的氨态氮浓度8mM水平和目的氨态氮浓度32mM水平，每个水平添加5种不同尿素作为处理，其中1种处理添加普通尿素作为对照组，其余4种为不同来源的缓释尿素，每个处理4个重复，分别于培养后的0h、2h、4h、6h、8h、12h、24h测定产气量和氨氮浓度，在培养后的24h终止发酵，采集样品测定pH值、干物质消失率和挥发性脂肪酸等指标采集发酵液用于测定发酵参数。结果显示在同一目的氨态氮浓度下，不同缓释尿素对瘤胃发酵参数的影响没有显著差异（P＞0.05）；相较于8mM组，32mM组的产气量显著减低（P＜0.05），pH值显著升高（P＜0.05）；相较于8mM组，32mM组的干物质消化率有下降趋势，但不显著（P＞0.05），乙酸比例和总挥发酸有上升趋势，但不显著（P＞0.05），丙酸比例和乙丙比无显著变化（P＞0.05）。结果表明不同缓释尿素对瘤胃发酵参数的影响不大，但高浓度的尿素水平会抑制瘤胃发酵。
目录
摘要 3
关键词 3
Abstract 3
Key words 3
引言.............................................................................................................................................3
1 材料与方法 4
1．1 试验设计 4
1．2 试验材料 4
1．2．1 添加剂及发酵底物 4
1．2．2 瘤胃液采集及培养液配制 4
1．3 指标测定 5
1．3．1 产气量 5
1．3．2 pH值 5
1．3．3 干物质消失率 5
1．3．4 瘤胃氨态氮（NH3N） 5
1．3．5 挥发酸（VFA） 5
1．4 数据分析 6
2 结果与分析 6
2．1 不同缓释尿素在不同水平下对瘤胃产气的影响 6
2 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: *351916072* 
．1．1 产气量变化 6
2．2 不同缓释尿素在不同水平下对瘤胃发酵参数的影响 6
2．2．1 pH值变化 6
2．2．2 干物质消失率 6
2．2．3 瘤胃氨态氮浓度变化 7
2．2．4 挥发酸浓度变化 7
3 讨论 8
4 结论 9
致谢 9
参考文献 9
不同来源及浓度缓释尿素对瘤胃体外发酵参数的影响
引言
我国是一个畜牧大国，畜牧业生产每年都需要消耗大量的蛋白质饲料，但目前国内的蛋白质饲料主要依靠于进口，这就使得生产成本居高不下。所以寻找能够替代蛋白质饲料的资源就成为了当下研究的重点。尿素是一种非蛋白氮（NPN），分子式为H2NCONH2，是一种白色无臭固体。自从Waesk[1]等于1897年首次报道了反刍动物能将非蛋白氮转化为菌体蛋白后，非蛋白氮产品作为蛋白质饲料的替代产品已被广泛使用[23]。瘤胃中的微生物能够分解利用尿素并合成微生物蛋白，但瘤胃微生物分解尿素的速率大约是微生物利用尿素的4倍。尿素的快速分解产生的氨态氮经瘤胃上皮快速吸收并进入血液[4]，从而引起动物的高血氨症而发生中毒现象[5]。于是人们将尿素经包被、化学或物理等方式加工处理后制成缓释尿素，以降低尿素在瘤胃中的释放速度。
目前，Puga等[6]发现日粮中添加尿素缓释剂后反刍动物的干物质采食量增加，在高纤维的饲粮中添加缓释尿素可以改善羊的瘤胃发酵，在饲粮中分别添加10%、20%、30%的尿素缓释剂后，瘤胃内pH值、NH3N和VFA的生成得到很好地改善。Owens等[7]证明了反刍动物饲用尿素缓释剂后，瘤胃内NH3N释放速度比尿素慢很多，可有效地增加采食量，同时也能够改善瘤胃的发酵效果。目前，国内外已经有很多关于缓释尿素对于反刍动物消化影响的研究，缓释尿素对发酵的研究也越来越完善，尿素缓释剂的加工技术已经越来越成熟。而目前市场上的缓释尿素种类繁多，但是关于不同缓释尿素之间以及不同缓释尿素在不同添加水平下对瘤胃发酵影响的比较研究还比较少，本次试验旨在探究市场上不同缓释尿素在两种不同剂量水平下对瘤胃发酵的影响，以期为实际生产提供理论基础。
1 材料与方法
1．1 试验设计
本试验是采用2×5双因素试验设计，设2个水平，按照尿素被分解以后的目标氨态氮浓度来设置水平，第一水平的目的氨态氮浓度为8mM（适宜浓度），第二水平的目的氨态氮浓度为32mM（高浓度）。在每个水平中设置添加4种不同来源缓释尿素以及普通尿素，共计5种不同尿素，作为不同处理，每个处理4个重复。采用学校动物房中安装有瘤胃瘘管湖羊作为瘤胃液供体，进行体外发酵试验。
1．2 试验材料
1．2．1 添加剂及发酵底物 试验所用5种不同尿素分别为普通尿素、22号缓释尿素、23号缓释尿素、24号缓释尿素、25号缓释尿素。试验的发酵底物为1g低蛋白混合日粮。试验会在采集瘤胃液的前一天，将发酵底物和5种不同尿素按照试验设计添加到发酵瓶中，添加结束之后盖好瓶塞，并将发酵瓶放置在39℃的恒温箱中。
1．2．2 瘤胃液采集及培养液配制 瘤胃液是来源于大学动物房四只健康的瘘管湖羊（体重30±2kg），日粮精粗比为 55:45 [精料补充料 550 g (玉米 420g、豆粕 40g、麦麸 40g、NaCl 10g、NaHCO3 10g预混料 30g)，苜蓿干草250 g、麦秸200g]，每日8:00和17:00等量饲喂，自由饮水。在采集瘤胃液前按上述日粮饲喂10d。在早饲前采集瘤胃液，于早上7点左右将导管经瘘管插入湖羊瘤胃，用针筒吸取瘤胃液（每只瘘管湖羊抽取约200mL瘤胃液），保存于经39℃预热并充满二氧化碳的试剂瓶内，把试剂瓶放置于装有39℃温水的保温瓶中并迅速带回实验室。用四层洁净纱布过滤瘤胃液，在获取瘤胃液和处理瘤胃液时都要保证严格厌氧。
人工唾液原液参照Menke等[8]方法配制（表1），人工唾液原液由A、B、C、D和E共5部分组成，除了E是需要现配现用外，A、B、C、D都是提前一天配制好的。采集瘤胃液的当天配制人工唾液，每1000mL人工唾液按表2的顺序和比例进行配制，配制好5000mL人工唾液（预留一部分）后置入水浴摇床或水浴锅内，通入CO2气体（气流不易过大），使人工唾液由蓝色转变为粉红色，最终变为无色，并加热至39±0.5℃。将人工唾液原液与过滤后的瘤胃液按比例混合均匀（瘤胃液：人工唾液原液体积比为10:90）得到培养液；在严格要求厌氧的条件下向每个发酵瓶分装100mL培养液（90mL人工唾液原液+10mL瘤胃液），在分装时需要不断向发酵瓶中通入CO2 以保证厌氧，分装好后用异丁基塑胶塞塞住瓶口，再用铝盖密封，用针头放气平衡内外压力；置于40℃恒温水浴箱中恒温培养24h。

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