哺乳动物的绝大部分卵泡(75%-99%)会发生闭锁、退化，而颗粒细胞凋亡是卵泡闭锁的主要原因。miRNA在卵巢中广泛表达，在卵泡闭锁过程中发挥重要的调控作用。实验室前期发现miR-1306可通过靶向TGFBR2调控猪卵巢颗粒细胞凋亡和卵泡闭锁。本文继续以miR-1306为研究对象，进一步确认miR-1306在猪卵巢颗粒细胞凋亡中的作用和机制。采用qRT-PCR技术分析miR-1306对猪卵巢颗粒细胞中凋亡标志基因BCL-2和BAX表达水平的影响；采用western blot技术分析miR-1306对猪卵巢颗粒细胞中TGFBR2下游蛋白SMAD2、p-SMAD2和SMAD4的水平的影响；采用核质分离和western blot技术分析miR-1306对猪卵巢颗粒细胞中SMAD蛋白入核的影响。结果发现过表达和干扰miR-1306后，猪卵巢颗粒细胞中BCL-2、BAX表达水平和BCL-2/BAX比值均发生显著变化，证实miR-1306是猪卵巢颗粒细胞的促进因子；过表达miR-1306后，猪卵巢颗粒细胞中SMAD4和p-SMAD2蛋白的表达量极显著降低，p-SMAD2/SMAD2比值极显著降低（P<0.01），证实miR-1306可抑制猪卵巢颗粒细胞中TGF-β/SMAD信号通路活性；成功进行了猪卵巢颗粒细胞的核质分离，发现过表达miR-1306后，猪卵巢颗粒细胞核中p-SMAD2明显减少，证实miR-1306可抑制SMAD复合物入核，从而抑制TGF-β/SMAD信号通路的功能。上述结果揭示miR-1306可通过调控TGF-β/SMAD信号通路影响猪卵巢颗粒细胞凋亡。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言2
1 材料与方法3
1.1 实验材料3
1.1.1 试验样品3
1.1.2 实验仪器设备3
1.1.3 主要试剂3
1.1.4 试剂配制4
1.2 试验方法4
1.2.1 猪卵巢颗粒细胞培养4
1.2.2 总RNA提取5
1.2.3 反转录5
1.2.4 qRTPCR检测6
1.2.5 细胞蛋白提 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: &351916072& 
取6
1.2.6 western blot7
1.2.7 统计分析6
2 结果与分析7
2.1 过表达miR1306对猪卵巢颗粒细胞中凋亡标志基因表达的影响7
2.2 抑制miR1306对猪卵巢颗粒细胞中凋亡标志基因表达的影响8
2.3 miR1306对猪卵巢颗粒细胞TGFβ/SMAD信号通路活性的影响8
2.4 miR1306对猪卵巢颗粒细胞TGFβ/SMAD信号入核的影响9
3 讨论10
3.1 miR1306通过调控凋亡基因BCL2和BAX促进猪卵巢颗粒细胞凋亡10
3.2 miR1306通过影响SMAD蛋白表达调控TGFβ/SMAD信号通路10
3.3 miR1306通过影响SMAD蛋白入核调控TGFβ/SMAD信号通路10
致谢11
参考文献12
miR1306在猪卵巢颗粒细胞凋亡中的作用

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