本研究对猪链球菌3型（Ss 3）菌株进行了生长曲线测定、小鼠致病性实验、仔猪免疫攻毒实验。生长曲线测定结果表明Ss 3菌株培养后0 h～5 h达到对数生长期为，OD600nm值达到最高峰的培养时间是8 h；生长平台期的活菌数为3.35×109 cfu/mL。小鼠致病性实验结果表明Ss 3菌株对4周龄SPF小鼠的半数致死量（LD50）为4.03×107 cfu/mL，小鼠表现出腹泻、结膜炎、共济失调等神经症状，从死亡小鼠的脑和肝组织中能分离到Ss 3。仔猪免疫攻毒实验结果表明攻毒对照组感染仔猪的关节炎症状、体温升高症状及菌血症可持续3天，鼻拭子不排菌，不致死；个别仔猪感染第2天开始出现神经症状，并持续存在，第5天可从脑中分离到Ss 3，而其他脏器分离不到菌。Ss 3油乳剂灭活疫苗2次免疫可以保护仔猪不产生明显的临床症状、体温基本不升高、菌血症明显减少，疫苗免疫有效。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言2
1 材料与方法2
1.1 材料 2
1.1.1菌种来源2
1.1.2主要试剂2
1.1.3主要仪器2
1.2 方法 2
1.2.1菌株的复苏与培养2
1.2.2菌株生长曲线测定3
1.2.3活菌平板计数4
1.2.4小鼠致病性试验4
1.2.5 Ss 3油乳剂灭活疫苗制备4
1.2.6仔猪免疫攻毒试验4
2 结果与分析5
2.1菌株生长曲线5
2.2小鼠致病性试验5
2.3仔猪免疫攻毒试验8
2.3.1临床症状8
2.3.2体温8
2.3.3血液和鼻拭子分离细菌8
2.3.4剖检及脏器分离细菌8
3 讨论8
致谢8
参考文献8
猪链球菌3型的致病性与免疫原性研究
引言
猪链球菌是具有荚膜的一种革兰氏阳性球菌。可根据其细胞壁抗原成分将其大致归类为兰氏分群（Lancefieldgroup D）D群链 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ￥351916072￥ 
球菌。根据其荚膜抗原（CPS）的不同，猪链球菌被分为35（1～34型,1/2型）种血清型[1],常见的高致病血清型为1、2、4、5、14、16型，除7型R345、9型Y188、Y198不能完全致小白鼠死亡外，其他型菌株均可致小白鼠完全死亡[2]。猪链球菌的定植部位为猪的上呼吸道，尤其是扁桃体和鼻腔[3]。部分血清型的猪链球菌具有致病性，主要通过伤口感染。可引起猪的急性败血症（septicemia with sudden death）、脑膜炎（meningitis）、关节炎（arthritis）、心内膜炎（endocarditis）、肺炎（pneumonia）等疾病[4]。可引起人类感染，造成细菌性脑炎（bacterial meningitis）或引起中毒样休克综合征（toxic shocklike syndrome）。
50年代，在英国和荷兰就有人报道了猪和猪群中由链球菌菌引起的脑膜炎、关节炎和败血症[5]。1969年在美国的爱阿华，从患有急性肺炎和败血病的猪分离到了同样的猪链球菌[6]。目前，美国、爱尔兰、香港、日本荷兰、加拿大、澳大利亚、新西兰、比利时、巴西、丹麦、挪威、中国都有发生猪链球菌的报道。
猪链球菌3型（Ss 3）的研究在国内外还很少，仅在2015年苏南的YK猪场的21份鼻拭子中分出1株3型[7]。本研究主要通过细菌生长曲线试验、小鼠半数致死量试验、仔猪免疫攻毒实验，研究猪链球菌3型的致病性与免疫原性。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌种来源
经分离并鉴定的猪链球菌3型菌株由江苏省农业科学院兽医研究所人兽共患病防空研究室保存。
1.1.2 实验动物
4周龄SPF雌鼠购于青龙山实验动物场；30日龄Ss阴性仔猪购自江苏某猪场。
1.1.3 主要试剂
PCR Thermal Cycler Dice TP600 ( 日本Takara )；THB购自美国BD公司；2 x Taq PCR Master Mix、DL 2000 marker购自东盛生物科技有限公司。
2 x mix购买于北京擎科新业生物技术有限公司；PCV2检测引物、PCV3检测引物由金斯瑞生物科技有限公司合成；TAE电泳缓冲液购买于台湾生工有限公司；核酸染料购买于北京擎科新业生物技术有限公司；DL2000 Marker购买于北京擎科新业生物技术有限公司；琼脂粉购买于北京擎科新业生物技术有限公司。
1.1.4 主要仪器
组织研磨机购买于美国MP Biomedicals公司；超净工作台购买于苏州安泰空气技术有限公司；离心机、PCR仪购买于德国Eppendorf公司；核酸电泳仪购买于北京君意东方电泳设备有限公司；全自动数码凝胶成像系统购买于上海天能科技有限公司。
1.1.5 细菌培养基配制
THB液体培养基：取3gTHB粉末，加入100mL H2O中，配成液体，121℃ 15min高压，置于4℃备用。
THB固体培养基：取3gTHB粉末、1.5g琼脂粉，加入100mL H2O中，配成液体，121℃，15min高压，倒平皿，置于4℃备用。
1.2 方法
1.2.1 菌株的复苏与培养
将Ss 3菌株从70℃冰箱取出，在THB固体培养基上划线，置于37℃温箱培养24h，挑取3个单菌落于5mL THB液体培养基中，置于37℃摇床，以200rpm的速度摇菌过夜。
1.2.2 菌株生长曲线测定
准备51管5mL THB液体培养基，每管加入200μL 37℃摇菌过夜的原代菌液，每3管一组，分为17组。每隔1h，取一组（3管）测OD600，绘制细菌生长曲线。
1.2.3 活菌平板计数
取对数生长期的菌液，用无菌生理盐水进行10倍倍比稀释，每个稀释度取200μL在THB培养皿上涂匀，每个稀释度做3个重复，将平皿倒扣，置于37℃恒温培养箱中培养24h。取出，数每块儿THB平皿上长出的单菌落数量，选择单菌落数量在20～200个之间的平皿，计算菌液中的活菌数[8]。

原文链接：http://www.jxszl.com/yxlw/dwyx/562279.html