pedvs蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备(附件)【字数：5379】
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1实验材料 2
1.1.2主要试剂 2
1.1.3主要仪器2
1.2实验方法2
1.2.1试剂的配置2
1.2.2重组质粒的提取和鉴定3
1.2.3重组质粒与BL21的转化3
1.2.4重组质粒的诱导表达和纯化3
1.2.5确定诱导表达最优温度和IPTG最优浓度 3
1.2.6确定重组蛋白的分布情况3
1.2.7重组蛋白的过Ni+柱纯化4
1.2.8多抗血清的制备4
1.2.9间接ELISA检测多克隆抗体效价4
1.2.10Western bolt检测多克隆抗体的特异性4
2结果与分析5
2.1重组质粒的酶切鉴定5
2.2确定诱导表达最优温度和IPTG最优浓度5
2.3重组蛋白分布情况的检测5
2.4 SDSPAGE检测纯化的蛋白的浓度和纯度5
2.5酶联免疫吸附实验(ELISA)检测多克隆抗体的效价6
2.6 Western blot检测多克隆抗体特异性6
3讨论6
致谢7
参考文献7
PEDV S蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备
引言
猪流行性腹泻（porcine epidemic diarrhea，PED）是由猪流行性腹泻病毒（ *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072#
porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）引起的猪的一种高度接触性肠道传染性疾病。临床以呕吐、腹泻和脱水为主要特征[1]。该病对各种年龄阶段的猪均易感，尤其是 7 日龄以内的哺乳仔猪，感染后死亡率可达 100 ﹪。我国于1984 年证实 PEDV 在我国猪场的存在[2]，1995 年起，预防 TGEV（porcine transmissible gastroenteritis virus）和PEDV感染的二联灭活苗和二联弱毒苗[3]为我国 PED 的防控发挥了重要作用。2006 年以前，PEDV 在我国猪群中主要呈现散发。然而近年来，PEDV 在我国多个省份再次爆发流行[3]，已经成为制约我国养猪业发展的一个比较严重的问题。
PEDV属于尼多病毒目，冠状病毒科，冠状病毒属的冠状病毒1型成员。基因组为线性单链RNA，编码的蛋白包括结构蛋白和非结构蛋白，包括纤突蛋白（S蛋白），小膜蛋白（E蛋白），膜糖蛋白（M蛋白），核衣壳蛋白（N蛋白），复制酶多聚蛋白和ORF3蛋白。其中S蛋白是由S基因编码的位于病毒粒子表面的纤突糖蛋白[5]，而仔猪小肠粘膜中表达大量的氨基肽酶，被认为是PEDV的受体[6]。PEDV通过与该受体的结合得以入侵和复制。所以S蛋白是PEDV疫苗研发中重要的靶蛋白[7]，也是目前PEDV亚单位疫苗的研究热点。
PEDV的预防和控制离不开接种疫苗，商品化的疫苗包括灭活疫苗，弱毒疫苗[8]。处于研究中的疫苗有核酸疫苗，亚单位疫苗和转基因植物疫苗。亚单位疫苗安全性高，纯度好，稳定性好，产量高，但是免疫效果比传统疫苗稍差，目前还处于初级研究阶段。
1 材料与方法
1.1实验材料
1．1. 1 实验材料
已有公司构建完成的含有目的基因与载体PET28a的重组质粒在感受态细胞DH5a中
1．1. 2 主要试剂
质粒抽提试剂盒（Geneaid Biotech），脲（南京鼎思生物技术有限公司），Na3po412H2O（成都市科龙化学试剂厂），NaCL（江苏强盛化学股份有限公司），咪唑（南京鼎思生物技术有限公司），β巯基乙醇（天津市科密欧化学试剂公司），葡萄糖（天津市科密欧化学试剂公司），EDTA（南京鼎思生物技术公司）， TrisCl（南京鼎思生物技术公司），SDS（南京鼎思生物技术公司），NaOH（天津市科密欧化学试剂公司），冰乙酸，乙酸钾（上海强顺化学试剂有限公司），异丙醇（天津市科密欧化学试剂公司），溶菌酶（南京鼎思生物技术有限公司），LiCl（江苏强盛功能化学股份有限公司），PEG 8000（生工生物工程有限公司）。PBST
1．1. 3 主要仪器
电子天平（梅特勒托利多仪器（上海）有限公司）
PH检测仪（美国精骐有限公司）
恒温振荡器（美国精骐有限公司）
电热恒温水槽（上海精宏实验设备有限公司）
二氧化碳培养箱（赛默飞世尔科技（中国）有限公司）
离心机（美国精骐有限公司）
旋涡混匀器（美国精骐有限公司）
制冰机（美国精骐有限公司）
超声破碎机（美国精骐有限公司）
基因定量分析仪（赛默飞世尔科技（中国）有限公司）
紫外分光光度仪（美国精骐有限公司）
电泳仪（美国精骐有限公司）
图片采集系统（赛默飞世尔科技（中国）有限公司）
2 实验方法
原文链接：http://www.jxszl.com/yxlw/dwyx/562196.html
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