敌草胺的化学名为N,N-二乙基-2-(α-萘氧基)丙酰胺，是一种在作物播种后出苗前使用的特异性除草剂，除草效果好，使用量逐年增长，但敌草胺半衰期长，易溶于水，带来了一系列环境问题。使用生物降解的手段对治理农药污染有重要意义，分离出高效的微生物降解菌极具研究前景，但在科学前沿报道中，有关敌草胺降解菌的研究滞后。在本文中，通过富集培养，分离到一株能高效降解敌草胺的菌株。16S rRNA基因测序和系统进化树分析结果表明，该菌属于鞘脂菌属，生理生化实验可知该菌最适宜生长的环境温度是30℃，最适pH值是7.0，且在此条件下，降解效率最高。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 1
1 材料与方法 2
1．1 培养基、试剂与材料 2
1．2 敌草胺降解菌株的分离 2
1．3 电镜观察 2
1．4 降解菌株的16S rRNA 基因序列分析 2
1．4．1 提取降解菌的总DNA 2
1．4．2 降解菌的16S rRNA基因的PCR扩增 3
1．4．3 PCR产物T/A克隆 3
1．4．4 制备感受态细胞 3
1．4．5 感受态细胞的转化 4
1．4．6 提取质粒DNA 4
1．5 降解菌株的生长特性 4
1．6 环境元素对菌株降解敌草胺的作用 5
2 结果与分析 5
2．1 分离筛选获得敌草胺降解菌 5
2．2 降解菌株的16S rRNA基因序列分析 5
2．2．1 降解菌总DNA的提取 5
2．2．2 16S rRNA基因的PCR扩增结果 5
2．2．3 构建系统进化树 6
2．3 外界因素的差异影响降解菌的繁殖 6
2．4 环境元素的差异对菌株降解敌草胺的作用 9
3 讨论 11
致谢 12
参考文献 12
敌草胺降解菌株的分离鉴定及降解特性研究
引言 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072# 

引言 自改革开放以来，中国农药的使用量大幅度增长，农民在施用过程中，盲目的增加施用强度[1]。虽然在防治病害、虫害、草害时，农药起到减少灾害带来的损失，降低经济效益亏的作用，但是由于大规模施药，农田中农药残留带来的污染愈发严重，一方面提高了杂草害虫的抗药性，农田中的生物多样性被破坏，生态系统逐渐失衡；另一方面，农药残留可以通过食物链的富集作用累积，人类食用后，严重时可影响人体器官的正常工作[2]。为缓解当前国内农药污染状况，人们常采用物理降解、化学降解方法作为短期处理方式，它具有一定优势，但从长远考虑，微生物降解针对性强，能彻底降解农药残留，也不会产生二次污染，处理污染的效率最高，最具研究前景[3]。
敌草胺的化学名是N,N二乙基2(α萘氧基)丙酰胺，又被称为萘草胺，大惠利[4]。化学构造如图1所示。在农业生产中起着芽前除草剂的作用，可以高效处理一年生单子叶杂草，还可以处理部分双子叶杂草、阔叶杂草[5]。在细胞有丝分裂过程中，敌草胺可通过阻断细胞周期G1、G2蛋白的合成，致使DNA合成中断，致使杂草逐渐死亡[6]。最近几年，随着环保意识不断增强，作为使用最多的农药种类，除虫剂类由于其高毒性被明令限用，相反除草剂类农药的使用表现出上升态势[7]，如敌草胺的使用量逐年增加[8]。敌草胺在土壤中具有吸附行为[9]。且半衰期较长[10]，降解慢，易残留在土壤中[11]，会影响后荏农作物的正常生长，不利于农田的长期耕作。敌草胺在水中的溶解度较高，可伴随地下水迁移，给水体环境带来危害，不仅如此，还可能进入生物体组织，产生不好的影响[12]。因此，获得可降解敌草胺的菌株造福环境，同时还具有一定的经济效益。

图1 敌草胺的化学构造式
1 材料与方法
1．1 培养基、试剂与材料
无机盐培养基（MSM）（1000 ml，pH 7.0）：
NH4NO3 1.0 g，K2HPO4 1.5 g，KH2PO4 0.5 g，MgSO47H2O 0.2 g，NaCl 1.0 g，；
GMSM培养基（1000 ml）：
Glucose 3.0 g，K2HPO4 1.5 g，KH2PO4 0.5 g，MgSO47H2O 0.2 g，NaCl 1.0 g；
DMSM培养基（1000 ml）：
K2HPO4 1.5 g，KH2PO4 0.5 g，MgSO47H2O 0.2 g，NaCl 1.0 g；
LB培养基（1000 ml）：
蛋白胨10 g，酵母粉5.0 g，NaCl 5.0 g，pH 7.0；
实验过程中使用到的试剂盒、有机试剂均来自实验室，由实验室负责人向公司购买。
1．2 敌草胺降解菌株的分离
土壤样品来自生产敌草胺的农药厂。在100 ml配置好的含有敌草胺（30 mg/L）的基础盐培养基中，加入2.0 g土样，150 rpm、30℃摇床培养7天，转接5%的菌液于新培养基中继续培养，重复操作四次。
将20 ml含30 mg/L敌草胺的基础盐液体培养基设为对照组，在此基础上添加2 ml的富集培养液设为实验组，在摇床为150 rpm,30℃下，培养7天后，可确定该菌是否具备降解敌草胺的能力。
将富集培养液进行梯度浓度稀释，依次从梯度稀释液中取0.1 ml溶液涂布于无机盐固体培养基，并进行三次重复，将涂布完成的平板置于恒温培养箱中30℃无光照条件下培养。在平板上菌落生长良好的情况下，挑取单菌落于LB试管中，150 rpm、30℃摇床培养。从长势良好的LB试管中转接1 ml菌液到20 ml含30 mg/L敌草胺的无机盐液体培养基中，150 rpm、30℃摇床培养7天。可以紫外观察纯培养获得的菌株降解敌草胺的效果。

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