科学研究表明，蜂花粉含有多种营养物质，具有养颜美容、增强体质、提高免疫能力、治疗前列腺疾病等功效。由于蜂花粉具有优良的营养价值，世界上掀起了一股研究蜂花粉的热潮。枸杞作为一种常见的中药，在我国西北部产量可观，而蜂花粉作为其雄配子，产量也很惊人，因此对枸杞蜂花粉进行深入系统的研究，可使这种丰富的资源焕发新的活力。近年来，关于枸杞蜂花粉中糖蛋白的研究鲜见报道，所以对枸杞蜂花粉中糖蛋白进行提取与分离纯化，研究它的生物活性，可为枸杞蜂花粉的推广与加工提供一定的理论基础与科学依据。 本文分别利用硫酸铵沉淀法和水提醇沉法对蜂花粉进行了提取，并有限的比较了两者的差异。利用DEAE-52纤维素柱层析法纯化粗品后，在一定程度上分析了理化性质及结构分析。
目录
摘要2
关键词2
Abstract2
Key words2
引言2
1材料、试剂及仪器3
1.1实验材料 3
1.2 实验主要试剂 3
1.3实验主要仪器3
2实验方法4
2.1水提法4
2.2 DEAE52纤维素柱层析法纯化4
2.3 基本理化性质分析4
2.4 SDSPAGE电泳4
2.5单糖衍生分析单糖组成 5
3 结果与分析5
3.1枸杞蜂花粉中糖蛋白的提取及纯化5
3.2电泳结果及其分析8
3.3枸杞蜂花粉单糖组成分析8
3.4枸杞蜂花粉提取物相对分子质量的测定11
4 讨论13
致谢14
参考文献14
枸杞蜂花粉糖蛋白的提取及分离纯化
引言
引言: 花粉是植物有性繁殖的雄性配子体，具有多种营养物质，其中包含大量的碳水化合物、蛋白质、脂类以及一些适量的黄酮、游离氨基酸、维生素、微量元素等活性物质。早在《神农百草经》中就记有花粉的应用，目前在欧洲和日本，对于花粉也有极高的评价。本论文中的蜂花粉是指蜜蜂采蜜时带回的花粉团，在蜂巢内经过储藏和发酵后形成的花粉。蜂花粉含有蛋白质、必需氨基酸、 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ￥351916072￥ 
多糖、维生素、不饱和脂肪酸、多酚和黄酮类等活性物质[1]近年来，蜂花粉的开发利用研究引起了广泛的关注，由于其具有高碳水化合物、高蛋白的特点，如果我们将其中的糖蛋白提取出来用于开发，那么将产生极大的社会效益，也可为食品保健提供一定的指导作用。
糖蛋白是指由比较短的，往往带有分支的寡糖与多肽共价连接而成的一类结合蛋白质[2]。1908年美国生物化学家协会的蛋白质命名委员会首次将糖蛋白定义为：由蛋白质分子和除核酸外的包含有碳水化合物基因的物质共同组成的一类复合物(compounds of the protein molecules with a substance or substances containing acarbohydrate group,other than nuleic acid)[3][4][5]在自然界中，糖蛋白广泛存在于动植物和某些微生物中，甚至于还存在于单细胞有机体和病毒中，在生物体中他们以各种形式存在于细胞膜、细胞质、血浆以及粘液中。如细胞膜中的免疫球蛋白，病毒和激素等的膜受体；血液中的激素蛋白质（促滤泡激素、促黄体激素等），血浆蛋白质（血清清蛋白、运铁蛋白等）；作为胞外基质的，胶原蛋白和层粘蛋白等。事实上，80%以上的蛋白质都是糖蛋白，包括许多酶、激素、毒素、载体蛋白、免疫球蛋白、结构蛋白、凝集素、受体、粘液组分等，甚至过去人们一直认为是“纯”的多糖，如糖原和纤维素，亦含有少量的共价结合的蛋白质[4][6]。近十年来，随着分离分析技术和分子生物学的发展，人们对于糖蛋白中的糖链结构和功能有了更深的了解。发现细胞识别包括粘着、接触抑制和归巢行为，免疫保护（抗原与抗体），代谢调控（激素与受体），受精机制，形态发生、发育、癌变、衰老、器官移植等，都与糖蛋白的糖链有关[7]。由于糖蛋白的重要作用和广泛存在，目前糖蛋白已经成为了各个前沿学科的研究热点，包括生物学、化学、生物化学、细胞生物学、免疫学、医药学以及食品科学等。
本次实验中，我们主要采用水提硫酸铵沉淀法和水提醇沉法提取糖蛋白。水提法的提取溶剂为蒸馏水，根据提取物的性质选取核实的温度、料液比和提取时间。水提法操作简单，无需特殊仪器，且节约成本。纯化方法则采用DEAE52纤维素柱层析法，主要原理是根据样品在各流动向中的分配系数不同，从而达到分离的目的。
综上所述，糖蛋白具有非常广阔的应用前景，虽然国际上已经是比较热门的领域，但是国内的起步比较晚，不管是在结构测定还是生物活性确定等方面，我们与发达国家还有一定的差距。经过已有的大量的科学研究表明，我国许多传统的中草药中的多糖具有比较大的应用价值，比如说有香菇多糖、山楂蜂花粉多糖、山茶蜂花粉多糖等等。枸杞作为一种最常见且有巨大功效的中草药，目前鲜有对其蜂花粉糖蛋白的提取、分离纯化和研究，因此，从枸杞蜂花粉中提取糖蛋白具有实际意义。
1 材料、试剂及仪器
1．1 实验材料
本实验的原料为宁夏枸杞的蜂花粉
1．2 实验主要试剂
硫酸铵（南京化学试剂股份有限公司）、牛血清白蛋白（国药集团化学试剂有限公司）、葡萄糖（SIGMA）、6%苯酚、浓硫酸（南京化学试剂股份有限公司）、氢氧化钠（西陇科学股份有限公司）、氯化钠、三氟乙酸（ALADDIN）、PMP（SIGMA）、甲醇（广东光华科技股份有限公司）、盐酸（南京化学试剂股份有限公司）、乙腈（TEDIA）、氯仿、30%丙烯酰胺（SOLARBIO）、1.5M TrisHCl，pH8.8（SOLARBIO）、1M TrisHCl，pH6.8（SOLARBIO）、四甲基乙二胺（TEMED）、预染marker（索莱宝公司，分子量范围：10KDa~170KDa）、冰乙酸、偏重硫酸钠、1%过碘酸盐溶液（含7%冰乙酸）、Schiff试剂
1．3 实验主要仪器
水浴恒温振荡器（金坛市科析仪器有限公司）、电子天平（梅特勒托利多仪器有限公司，AL104）、电热鼓风干燥箱（上海恒科技有限公司）、真空抽滤装置（河南省予华仪器有限公司）、旋转蒸发仪、冻干机、恒流泵（上海青浦沪西仪器厂）、全自动部分收集器（上海沪西分析仪器厂有限公司）、干式恒温器（杭州奥盛仪器有限公司）、Agilent 1100高效液相色谱仪、可见光分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）、双光束紫外可见分光光度计（普析，TU1900）、电泳仪、凝胶成像仪

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