γ-氨基丁酸（GABA）作为植物应对逆境胁迫的代谢产物之一，在受到多种逆境胁迫时含量有显著提高。文献报道提高GABA含量可增强茶叶的保健功能，而厌氧富集相较于其他方法不仅操作简单、成本低且效果明显。本研究采用真空胁迫处理探究厌氧富集GABA的效果，并从生理与分子层面探讨真空厌氧处理对GABA合成代谢途径的影响。将茶鲜叶分别真空处理0 h、3 h、6 h、9 h，测定白茶中GABA、谷氨酸及相关茶叶品质成分含量，分析GABA支路中相关酶调控基因的表达情况。试验结果表明，采用真空厌氧处理可有效富集GABA，处理9 h效果最好，与对照相比GABA含量增加约142%。但主要品质成分茶多酚含量显著下降，游离氨基酸总量显著提高。同时GABA支路的相关基因相对表达量均有显著改变，谷氨酸脱氢酶（GDH）基因的相对表达量呈显著上升趋势；谷氨酸脱羧酶（GAD）基因表达趋势不一，GAD1表达先上调后下调，GAD2总体表现出表达上调，GAD3表达则先下调后上调；γ-氨基丁酸转氨酶（GABA-T）基因相对表达量呈现出先下降后上升的趋势。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1 材料与方法3
1.1 材料 3
1.1.1 试验材料 3
1.1.2 试验试剂 3
1.1.3试验仪器 3
1.2 方法 3
1.2.1 厌氧富集及制样3
1.2.2 测定GABA和Glu含量3
1.2.3 主要品质成分含量测定3
1.2.3.1 茶多酚含量测定3
1.2.3.2 游离氨基酸总量测定3
1.2.3.3 水浸出物含量测定4
1.2.3.4 其他品质成分含量测定4
1.2.4 RNA提取及反转录4
1.2.5 qRTPCR分析4
1.2.6 RNA提取及反转录4
1.3 数据分析4
2 结果与分析5
2.1 含量测定结果及分析5
2.1.1 GABA及谷氨酸含量变化5
2.1.2 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: @351916072@ 
主要品质成分含量及分析5
2.2 qRTPCR结果与分析6
3 讨论 7
3.1 GABA厌氧富集效果及对茶叶品质的影响7
3.2 GABA合成代谢途径7
4 结论 8
致谢8
参考文献8
厌氧富集白茶中GABA及其代谢途径的研究
引言
γ氨基丁酸（GABA）是一种以自由态普遍存在于生物中的四碳非蛋白质氨基酸，在脊椎动物中，GABA是中枢神经系统中重要的抑制性神经递质，具有诸如降血压、镇静神经、缓解焦虑及增强脑功能等作用[1]。1949年Steward首次在土豆块茎中发现γ氨基丁酸[2]，随后的研究则发现作物组织中GABA含量水平显著高于其他非蛋白质氨基酸[34]。且GABA作为植物应对逆境胁迫的代谢产物之一，在受到多种逆境（低氧、低温及高盐等）胁迫时含量水平均有显著提高。目前，GABA的富集技术和关于GABA在植物逆境胁迫下的代谢途径是研究的热点之一。而茶作为一种广为推广的健康饮品，也是开发为高GABA食品的理想对象。
目前常用的GABA 富集方法主要有低氧胁迫、低温胁迫、高盐渗透胁迫、微生物发酵法以及超声波、高温热激、酸性刺激等方法。低温胁迫常需与其他方法联用[13]，而高盐渗透处理起来较为繁琐，超声波等胁迫方法成本较高；相较之下，低氧胁迫具有成本低、操作简单、效果明显等优势。1987年，日本Tsushida首次发现经充氮厌氧处理后的茶鲜叶积累了大量的GABA，且用此鲜叶制成的γ氨基丁酸茶具有明显的降血压功效[5]。但厌氧处理可能会影响成茶品质，处理时间过长会影响成茶外形、色泽等，而厌氧/好气交替处理易出现红梗红叶，温度过高则会使叶底变黄，品质成分含量降低；使用浸泡法进行厌氧胁迫则容易产生水闷味[22,23]。
选择厌氧处理，对处理方法、处理时间以及温度都需要合理选择，避免降低成品茶品质。白茶加工工艺简单，仅涉及萎凋、晒干或低温烘干，既不杀青破坏酶的活性，也不揉捻促进内含成分氧化，最大程度的保留了茶叶中的茶多酚、游离氨基酸等各种有益成分。白茶品质特点鲜明，香气清鲜、滋味鲜醇，具有抗氧化、降血压等保健功效[67]，且白茶近些年越来越受欢迎，市场份额增加。因此探究厌氧处理富集GABA的效果，可用于指导γ氨基丁酸白茶的生产，增强白茶的保健功能，提高其市场竞争力。
高等植物通过三羧酸循环的一个分支代谢积累GABA的途径叫做GABA旁路或GABA支路。GABA支路是高等植物代谢积累GABA的主要途径，如图1所示，该支路以谷氨酸（Glu）作为底物，谷氨酸经谷氨酸脱羧酶（GAD，EC 4.1.1.15）催化生成GABA[8]，随后GABA被γ氨基丁酸转氨酶（GABAT, EC 2.6.1.19）催化转化为琥珀酸半醛（Succinic semialdehyde, SSA），琥珀酸半醛在线粒体中被琥珀酸半醛脱氢酶（SSADH, EC 1.2.1.24）氧化生成琥珀酸（Succinic acid，SSC），琥珀酸随后便进入到三羧酸循环中[8]。谷氨酸是GABA的合成前体物质，其含量对GABA的合成有很大影响，所以谷氨酸的合成与代谢也是本次试验需要探究的。厌氧富集GABA的主要目的是为了增强茶叶的保健功能，但要尽量避免造成茶叶品质成分的含量下降，影响茶叶品质，同时探究真空厌氧处理对GABA合成代谢途径的影响。
综上所述，为探究厌氧处理富集GABA的效果及其对茶叶品质的影响，本研究拟采用真空处理富集GABA，探究GABA合成代谢途径变化；根据GABA富集效果及茶叶理化品质，选择适宜的真空富集处理。
图1 GABA 支路
Glu, 谷氨酸; GABA,γ氨基丁酸; GAD, 谷氨酸脱羧酶; GABAT, γ氨基丁酸转氨酶; GDH, 谷氨酸脱氢酶
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 试验材料 选择品种为‘龙井43’的茶鲜叶作为试验材料，采摘地点为南京市中山陵一留用试验茶园，2018年4月28日及5月21日，芽叶生长至一芽二叶和三叶时，进行釆摘，采摘标准为一芽一叶至一芽二叶。
1．1．2 试验试剂 主要试剂：GABA、Glu标准品（源叶，上海）、PrimeScript™ RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) 试剂盒、 EASYspinPlus多糖多酚/复杂植物RNA快速提取试剂盒（艾德莱，北京）、SYBR®Premix Ex TaqTM Ⅱ、Taq DNA聚合酶、RNase Free DNaseІ、MMLV反转录酶、RNA酶抑制剂购自TaKaRa公司。

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