摘要：实验室前期克隆了来自Bacillus vallismortis漆酶基因fmb-L820，并在大肠杆菌细胞内实现了高效异源表达。本实验的目的是建立一种简便、快捷的重组酶分离纯化方法，替代镍柱亲和柱层析（Ni-NTA）的方法，并初步探索重组漆酶对玉米粉催化作用效果。本论文首先利用重组fmb-L820热稳定的特点，建立了分离纯化方法(H/AS)：70℃加热10min，50-60%饱和度的硫酸铵分级沉淀，透析得到纯酶。H/AS法纯化倍数可以达到10.23，回收率为23.4%，而Ni-NTA法纯化倍数为3.37，回收率为10.7%。H/AS法纯化的重组漆酶分子量为72kDa；最适反应温度为84℃；在70℃下稳定性最好，10h时酶活力还保留有79.28%；在酸、碱性环境下，最适pH分别为4.8和7.5；以ABTS为底物，Km=3.627×10-5mol/L，Vmax=518.13μmol/(L*min)；还研究了金属离子和抑制剂对酶活性的影响；并与Ni-NTA法纯化的酶的酶学性质进行了比较。最后，将纯化的重组漆酶应用于玉米粉，酶促样品与未经酶催化处理的样品比较外观产生颜色差异，产物经全波长扫描检测，初步发现可能有新的物质产生。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words 4
引言4
1 材料与方法5
1.1 材料5
1.1.1 菌种5
1.1.2 主要试剂5
1.1.3 培养基5
1.1.4 透析袋6
1.1.5 玉米粒6
1.1.6 实验仪器6
1.2 方法6
1.2.1 fmbL820 粗漆酶液制备 6
1.2.2 fmbL820漆酶纯化7
1.2.3 fmbL820 纯化漆酶的性质测定 8
1.2.4 fmbL820漆酶应用于玉米粉8
2 结果与分析9
2.1 fmbL820漆酶纯化9
2.1.1 不同饱和度硫酸铵纯化fmbL820漆酶的效果 9
2.1.2 不同纯化方法效果比较9
2.1.3 纯化方法优化 10