摘要：本论文采用平板培养和液体培养两种富硒方式，从生长情况和富硒特性两方面对杏鲍菇菌丝体富硒特性进行研究。结果表明：低硒浓度条件下，杏鲍菇菌丝体生长良好；较高的硒浓度会抑制杏鲍菇菌丝体的生长。当硒处理浓度为60 mg/L和40 mg/L时，菌丝体的有机硒含量和有机化率分别达到最高。对菌丝体中硒的形态分析研究显示，当培养基硒浓度为40 mg/L时，菌丝体中主要为硒代蛋氨酸（SeMet）和硒代胱氨酸（SeCys2）两种硒形态，两者的含量占总硒的79%。在培养过程中单一增加硒含量，并不能使硒代氨基酸含量显著提高，更多的硒转化为Se（IV）。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1主要材料与试剂2
1.2主要仪器设备2
1.3试验方法2
1.3.1培养基制备2
1.3.2富硒杏鲍菇菌丝体平板培养2
1.3.3富硒杏鲍菇菌丝体液体培养2
1.3.4菌丝生长指标测定2
1.3.5菌丝总硒含量测定2
1.3.6菌丝体有机硒含量测定3
1.3.7菌丝体中硒的形态分析3
2 结果与分析3
2.1硒处理对杏鲍菇菌丝体长势的影响3
2.1.1平板培养菌丝体对硒的耐受性分析3
2.1.2富硒液体培养杏鲍菇菌丝体耐硒能力分析5
2.2液体培养杏鲍菇菌丝体富硒能力的研究5
2.3硒处理对杏鲍菇有机硒含量的影响6
2.4富硒杏鲍菇菌丝体硒形态分析7
3讨论8
3.1杏鲍菇菌丝体的耐硒能力8
3.2杏鲍菇菌丝体的富硒能力9
3.3杏鲍菇菌丝体硒形态分析9
3.4红色单质硒的解毒作用9
致谢10
参考文献11
杏鲍菇菌丝体富硒特性研究
引言
硒是人体所必需的重要微量元素之一，它可以提高人的免疫力、增进人体的基础代谢、减小微量元素毒性，还具有抗氧化和促进生长发育等功能[1]。
 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q:  3_5_1_9_1_6_0_7_2 
此外，硒还与人体健康息息相关，缺硒可能引发糖尿病、肿瘤、微血管出血、心肌变性坏死等各种疾病[2]。但是硒的地区分布很不均匀，土壤缺硒是全世界范围内的普遍问题。我国的缺硒问题同样突出，低硒带占据国土面积高达70％左右。这些地区的农作物无法在生长阶段从土壤中获取足量的硒，由此导致了食物链的常年缺硒问题 [3]。因此，开发富硒产品将有助于提高我国人民健康水平。
食用菌种类繁多、营养丰富，是广受欢迎的餐桌美食，通过对食用菌硒营养强化，可以使食用菌具有较高的硒含量，同时将无机硒转化为有机硒[4]。杏鲍菇（Pleurotus eryngii Quel）是一种品质优良的食用菌品种，是老少皆宜的集食用、药用于一体的珍稀食用菌新品种，且具有良好的富集微量元素的作用[5]。人体对有机硒的吸收率优于无机硒，且有机硒污染小，生物活性高。因此，通过发酵培养富硒杏鲍菇菌丝体，可以弥补天然食用菌中硒含的不足，对于更好地促进硒的吸收，增进人体健康具有重要意义。
虽然硒元素有益于人体健康，但过量的硒会导致疾病。人体对硒剂量的适应范围相对较窄，当硒元素的摄入量不足时会提高心肌炎和其他遗传疾病的发病率，并导致提前衰老等现象的出现。人体对硒元素的耐受上限为每日400 μg，高于此剂量则会引发皮肤粗糙、肠胃混乱、脱发等现象，还会导致其他神经功能障碍的出现，如易怒、烦躁等[6]。综上，测定富硒培养杏鲍菇菌丝体的硒含量和硒的存在形态具有重要意义。
1 材料与方法
1.1 主要材料与试剂
本试验所用的材料和试剂主要有：杏鲍菇菌种、硒标液（1000 μg/L）、Na2SeO3、KNO3、KH2PO3、Mg2SO3、无水葡萄糖、琼脂。
1.2 主要仪器设备
本试验所用的材料和试剂主要有：微波消解系统、ICPMS（美国Agilent公司，7700）、冷冻离心机、恒温恒湿箱、电子天平、冷冻干燥机。
1.3 试验方法
1.3.1 培养基制备
（1）PDA培养基：土豆20%、琼脂2%、葡萄糖2%；
（2）种子培养基：土豆20%、葡萄糖2%、酵母粉1%、蛋白胨1%、KH2PO4（0.1%）、MgSO47H2O（0.1%）、VB少许；
（3）液体发酵培养基：葡萄糖（4%）、酵母粉（0.4%）、KH2PO4（0.25%）、MgSO47H2O（0.06%）、VB（0.004%）、Na2SeO3。
1.3.2 富硒杏鲍菇菌丝体平板培养
（1）菌种活化：将试管种接种于PDA培养基，25℃ 恒温恒湿培养箱培养7天；
（2）平板培养：以硒元素浓度计，分别设置浓度为0、10、20、40、60、80、100、150、200 mg/L的平板培养基，用打孔器（φ=8 mm）在菌丝平板的边缘区域打取菌饼接种于平板培养基中央，以空白平板培养基作对照，每个硒处理浓度设置6个重复，用封口膜封口后倒置培养，黑暗培养10天，培养温度为25℃。
1.3.3 富硒杏鲍菇菌丝体液体培养
（1）种子液制备：将活化后的菌种，用打孔器（φ=8 mm）在菌丝平板的边缘区域打取菌饼接种于种子培养液中，每瓶培养液中接种3片，在30℃ ，150 r/min条件下在摇床中培养7天；
（2）富硒液体培养：以硒元素浓度计，配制硒元素浓度为20、40、60、80、100 mg/L的液体培养基，将液体菌种接种于培养基中，每瓶培养基100 mL，接种量6%，置于摇床中，30℃ ，150 r/min连续培养7天；
（3）菌丝体样品的制备：发酵液经4,000 r/min离心5 min，弃上清液，用蒸馏水清洗沉淀，离心，重复清洗，离心操作直到上清液不带发酵液颜色，收集菌丝体，冷冻干燥。
1.3.4 菌丝生长指标测定
在菌丝体平板培养过程中，每隔一天测量其菌落直径。测量方法为：首次测量在菌落任一位置测量菌落直径；二次测量在首次测量后逆时针旋转60°，再测量菌落直径；第三次测量在二次测量后逆时针旋转60°，测量菌落直径，最终测量结果为三次测量的平均值，按公式（1）、（2）求出生长速率和生长抑制率，将收集的菌丝体称重，按照公式（3）计算菌丝生物量。
菌落生长速率(mm/d)=菌落最终直径/生长天数 （1）
生长抑制率(%)=（对照净生长量处理净生长量）/对照净生长量×100% （2）
生物量(g/L)=菌丝干重/发酵液体积 （3）

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