目录
摘 要 II
关键词 II
ABSTRACT II
KEY WORDS II
引言 1
1 材料与方法 1
1.1 供试菌株、试剂与培养基 1
1.2 乳氟禾草灵降解菌株的富集、筛选 2
1.3 降解菌株系统发育树分析 2
1.4 降解菌株的生长特性 3
1.4.1 最适生长温度 3
1.4.2 最适生长pH 3
1.4.3 最适生长盐浓度 3
1.4.4 抗生素敏感性试验 4
1.4.5 其他生理生化特性的鉴定 4
1.5 降解菌株种子液的制备 4
1.6 菌株HME2降解特性研究 4
1.6.1 菌株HME2对乳氟禾草灵的降解效果 4
1.6.2 温度对菌株HME2降解乳氟禾草灵的影响 4
1.6.3 pH对菌株HME2降解乳氟禾草灵的影响 4
1.6.4 金属离子对菌株HME2降解乳氟禾草灵的影响 4
1.6.5 乳氟禾草灵初始浓度对菌株HME2降解效果的影响 4
1.7 乳氟禾草灵的检测方法 5
2 结果与分析 5
2.1 乳氟禾草灵降解菌株的分离 5
2.2 降解菌株16S rRNA基因序列分析 5
2.3 生理生化特征 6
2.3.1 最适生长条件 7
2.3.2 抗生素敏感性 7
2.4 菌株HME2对乳氟禾草灵的降解特性 7
2.4.1 菌株HME2对乳氟禾草灵的降解效果 7
2.4.2 温度对菌株HME2降解乳氟禾草灵的影响 8
2.4.3 pH对菌株HME2降解乳氟禾草灵的影响 8
2.4.4 金属离子对菌株HME2降解乳氟禾草灵的影响 9
2.4.5 乳氟禾草灵初始浓度对菌株HME2降解乳氟禾草灵的影响 9
3 讨论 10
致谢 10
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除草剂乳氟禾草灵降解菌株HME2的分离鉴定与降解特性研究
摘 要
乳氟禾草灵(lactofen)是二苯醚类除草剂的一种，广泛用于大豆、谷类作物、马铃薯和花生田的阔叶杂草的防治。由于其除草活性高和底物谱广等特点，乳氟禾草灵的使用量在不断上升，对环境造成污染。研究表明，微生物在去除环境污染物残留的过程中发挥着重要的作用。本论文分离到一株乳氟禾草灵降解菌株Edaphocola sp. HME2，研究了其降解乳氟禾草灵的降解特性。菌株HME2在72 h内对50 mg/L乳氟禾草灵降解率达到96.7%，最适降解温度为35℃，最适降解pH为7.0，Mg2+、Cu2+、Ca2+、Ni2+、Zn2+、Fe3+、Co2+、Cd2+(1 mM)对于菌株降解乳氟禾草灵都表现出抑制作用，其中Co2+的抑制最为显著，能抑制60%左右。
引言
随着农业经济的发展，为了预防和治理农作物生长过程中的大量病虫、杂草危害，农药大量使用。有机污染物如杀虫剂、除草剂的残留对环境的污染日益严重，带来了诸多的环境问题，同时对环境生物的健康造成负面影响[1, 2]。因而，这些有机污染物的降解和去除是亟待解决的问题。二苯醚类除草剂因其高效、低毒、高选择性的优点而被广泛使用 [3]。二苯醚类除草剂的典型代表乳氟禾草灵，又名克阔乐。因其高而广泛的除草活性，被用于防治多种作物的田间阔叶杂草的防除[4]。土壤、地下水及河流中都有乳氟禾草灵残留，长期残留给环境带来了污染，对环境生物造成潜在威胁。环境中残留的乳氟禾草灵对一些鱼类以及水生动物有较高的生物毒性[5]。
现今市场上二苯醚类除草剂有20多个品种[6]，国内外多次报道过二苯醚类除草剂降解菌株以及降解途径相关内容。菌株Shigella flexneri FB5，可以高效降解氟磺胺草醚[7]。二苯醚类农药广谱降解菌株Sphingomonas wittichii RW1，通过将二苯醚类硝基还原为氨基，氨基再酰基化完成降解。菌株Mycobacterium phocaicum MBWY1，能以乙羧氟草醚为唯一碳源进行生长[8]。Lysinibacillus sp.ZB1可以降解81.32％的氟横胺草酿[9]。
到目前为止，乳氟禾草灵的微生物降解及分子机制的相关报道仍较少，只有两株乳氟禾草灵降解菌株被分离到，分别是Bacillus sp. Za[10]和Brevundimonas sp. LY2[11]。乳氟禾草灵间接导致细胞膜脂质过氧化，从而破坏膜通透性，以达到除草的目的[12, 13]。
微生物在去除环境中残留的乳氟禾草灵过程中发挥着重要的作用[14]，分离鉴定出能够高效降解乳氟禾草灵的微生物对降低环境中乳氟禾草灵的残留具有重要意义，同时也能为其它酯类化学污染物的降解提供参考。本课题分离筛选出一株乳氟禾草灵降解菌株Edaphocola sp. HME2，并研究了其降解乳氟禾草灵的生物学特性以及降解特性。
1 材料与方法
1.1 供试菌株、试剂与培养基
供试菌株：菌株Edaphocola sp. HME2为本研究分离保存。
试剂：乳氟禾草灵原药购自上海安谱实验科技股份有限公司。原药用甲醇溶解配制成 10000 mg/L的储存液备用。甲醇、乙酸等有机试剂购自南京晚晴化玻仪器有限公司，卡那霉素(Km)和氨苄霉素(Amp)等抗生素购自生工生物工程(上海)股份有限公司，细菌药敏试纸购自杭州滨和微生物试剂有限公司，分子生物学试剂如pMD19T Vector、10 × T4 Ligase Buffer和T4 Ligase购自Takara，2 × Taq Mix Buffer等购自南京诺唯赞生物科技有限公司。

原文链接：http://www.jxszl.com/swgc/smkx/606408.html