目的通过对活血丹品质和碳循环相关土壤酶活性的测定，探究与碳循环相关的土壤酶活性和活血丹药材品质的相关性。方法采集活血丹不同居群植株及其根际土壤，用分光光度法分别测定蔗糖酶、木聚糖酶和内切葡聚糖酶活性，用比色法测定β-葡糖苷酶活性，用分光光度法测定活血丹内总黄酮含量，用HPLC法分别测定活血丹内熊果酸、齐墩果酸、绿原酸、咖啡酸和迷迭香酸含量，并利用统计软件分析其关联性。结果蔗糖酶活性与活血丹内总黄酮和咖啡酸含量正相关；木聚糖酶活性与醇溶性浸出物含量正相关；而内切葡聚糖酶活性与迷迭香酸含量正相关。结论影响活血丹药材品质的土壤碳循环相关酶主要是蔗糖酶活性、木聚糖酶活性，内切葡聚糖酶活性，β-葡糖苷酶对活血丹药材品质基本无影响。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
1 材料与方法 2
1．1 试验材料 2
1．2 碳循环相关土壤酶活性的测定 2
1．2．1 蔗糖酶活性测定 2
1．2．2 木聚糖酶活性测定 2
1．2．3 内切葡聚糖酶活性测定 2
1．2．4 β葡糖苷酶活性测定 3
1．3 活血丹指标性成分测定方法 3
1．3．1 醇溶性浸出物含量测定 3
1．3．2 总黄酮含量测定 3
1．3．3 三萜酸类成分含量测定 3
1．3．4 酚酸类成分含量测定 3
1．4 数据处理 3
2 结果与分析 4
2．1 活血丹不同居群的指标性成分含量分析 4
2．2 活血丹不同居群根际土壤碳循环相关酶活性分析 4
2．3 与碳循环相关的土壤酶活性和活血丹药材品质的相关性分析 4
3 讨论 5
3．1 活血丹不同居群的药材品质差异 5
3．2 活血丹不同居群的与碳循环相关的土壤酶活性差异 5
3．3 与碳循环相关的土壤酶活性与活血丹药材品质的相关性 6
致谢 6
参考文献 6
与碳循环相关的土壤酶活性和活血丹 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: #351916072# 
药材品质的相关性研究
引言
活血丹Glechoma longituba (Nakai) Kupr.为唇形科多年生草本植物，干燥地上部分入药，药材名连钱草[1]；味辛、微苦，性微寒，入肝、肾、膀胱经；功擅利湿通淋、清热解毒、散瘀消肿，适用于治疗热淋、石淋、湿热黄疸、疮痈肿痛、跌打损伤等症[2]。目前，对活血丹的研究主要集中在活血丹活性成分及其药理作用。活血丹的化学成分主要有挥发油、萜类、黄酮、生物碱和有机酸等化合物，如三萜酸类有齐墩果酸和熊果酸，酚酸类有绿原酸、咖啡酸和迷迭香酸，可以作为活血丹的检测指标[36]。现代药理研究表明活血丹具有抗菌、抗氧化、抗肿瘤、利胆、利尿和溶解结石等生物活性[711]。已有文献[1214]报道土壤因子中土壤pH、土壤容重、土壤重金属胁迫等会对活血丹药材品质产生一定影响，但关于土壤酶活性、尤其与碳循环相关的土壤酶活性和活血丹药材品质的未见报道。
土壤酶是土壤中最重要的组成成分之一，土壤中所进行的生物和生物化学过程是陆地生态系统功能的基础，其之所以能持续进行就得益于土壤中酶的作用。土壤酶的数量虽少，但作用很大：如脲酶可以促进土壤中有机化合物尿素分子酞胺碳氮健的水解，生成植物氮素营养来源—氨[15]；酸性磷酸酶、中性磷酸酶和碱性磷酸酶等3种磷酸酶能将有机或无机磷酸盐转化为植物可吸收的磷，在土壤磷素的转化方面起着关键作用[1617]。虽然单一种类土壤酶的催化作用可能是专一的，但土壤中酶的来源不同、种类繁多，故数量庞大的酶体系维持了土壤循环功能[1821]。土壤酶对土壤生态系统中的碳、氮、磷循环具有极其重要的作用[22]，如植物根际土壤中的碳循环相关土壤酶可将土壤中的蔗糖、木聚糖、纤维素等非还原糖转化为葡萄糖、木糖等还原糖，以利于植物根系对含碳有机物的吸收、促进植物生长发育。碳循环相关土壤酶主要涉及蔗糖酶、纤维素酶及木聚糖酶等。
近年来，由于生态环境变化，活血丹野生资源退化，产量下降[23]。本研究通过活血丹植株指标性成分含量与其种源地土壤中碳循环相关酶的酶活测定，分析了土壤中蔗糖酶、纤维素酶及木聚糖酶酶活等与活血丹指标性成分的相关性，探讨了碳循环相关土壤酶活性在活血丹药材品质形成中的作用，可为活血丹规范化栽培技术完善提供借鉴。
1 材料与方法
1．1 试验材料
试验所用活血丹Glechoma longituba (Nakai) Kupr. 经大学中药材研究所郭巧生教授鉴定。2018年9月在对活血丹分布统一调研后，选择将军山、栖霞山、上峰、紫金山、珍珠泉等5地作为从采样点，每个采样点均采用5点法采样。取样时选生长健壮的活血丹植株，洗净、晾干、放入55℃烘箱烘干至恒重、打粉、过60目筛后于阴凉干燥处保存备用；同期在活血丹着生地距地面20 cm取根际土壤样品，去除石头等杂物，风干后于4℃保存备用。
1．2 碳循环相关土壤酶活性的测定
1．2．1 蔗糖酶活性测定 分光光度法测定[16]。称5 g土样，置于50 mL 三角瓶中，注入15.0 mL 8%蔗糖溶液，5.0 mL pH5.5磷酸缓冲液和5滴甲苯。摇匀混合物后，放入恒温箱，在37℃下培养24 h。到时取出，6000 rpm 离心10 min。取上清液1 mL，加3 mLDNS试剂，沸水浴5 min，自来水流下冷却3 min，去离子水稀释至50 mL，用分光光度计测定508 nm下的光吸收值。为消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖引起的误差。每一土样需做无基质对照。整个实验需作无土壤对照。在本测定条件下，每24 h水解蔗糖产生1 mg葡萄糖，所需酶量定义为1个酶活力单位（u）。
1．2．2 木聚糖酶活性测定 分光光度法测定[24]。称2 g土样，加入8 mLpH6.0的磷酸盐缓冲液，震荡5 min使样品溶液充分混匀，静置于4℃过夜，用4层纱布过滤样品溶液，再将滤液在4℃下8000 r/min离心5 min，上清液为酶液。取1%木聚糖溶液1 mL，50℃预热3 min，样品管加1 mL的酶液，恒温水浴50℃反应30 min，反应完成后加入3 mL DNS,再在对照管加1 mL的酶液，沸水浴煮10 min骤冷，加去离子水至15 mL，10 000 r/min离心3 min，用分光光度计测定540 nm下的光吸收值。在本测定条件下，每分钟水解木聚糖产生1 μg木糖，所需酶量定义为1个酶活力单位（u）。

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