目的通过测定活血丹不同居群内醇溶性浸出物、总黄酮、三萜酸类、酚酸类成分含量，和其根际土壤与氮磷循环相关的土壤酶活性，分析与氮磷循环相关的土壤酶活性和活血丹化学成分之间的相关性。方法采集活血丹不同居群植株及其根际土壤，用分光光度法分别测定土壤脲酶、蛋白酶、碱性磷酸酶和中性磷酸酶活性，用分光光度法测定活血丹内总黄酮含量，用HPLC法分别测定活血丹内熊果酸、齐墩果酸、绿原酸、咖啡酸和迷迭香酸含量，并利用统计软件分析其关联性。结果土壤蛋白酶活性与总黄酮、熊果酸含量达到显著正相关，土壤碱性磷酸酶活性与醇溶性浸出物显著负相关，土壤中性磷酸酶活性与迷迭香酸含量呈显著正相关。结论活血丹的根际土壤可能通过土壤蛋白酶、碱性磷酸酶、中性磷酸酶完成土壤有效氮、磷的转化，继而影响活血丹的药用品质。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
1材料与方法 2
1.1试验材料 2
1.2活血丹药材指标性成分测定方法 2
1.2.1醇溶性浸出物含量测定 2
1.2.2总黄酮含量测定 2
1.2.3三萜酸类化合物含量测定 3
1.2.4酚酸类化合物含量测定 3
1.3与氮磷循环相关的土壤酶活性测定 3
1.4 数据处理 3
2结果分析 3
2.1活血丹不同居群的药材指标性成分含量差异 3
2.2活血丹不同居群的根际土壤氮磷循环相关酶活性差异 4
2.3与氮磷循环相关的土壤酶活性和活血丹药材品质的相关性分析 4
3讨论 5
3.1活血丹不同居群的药材指标性成分含量差异分析 5
3.2活血丹不同居群的根际土壤氮磷循环相关酶活性差异分析 5
3.3活血丹药材品质和氮磷循环相关的土壤酶活性的相关性 6
致谢 6
参考文献 7
与氮磷循环相关的土壤酶活性和活血丹药材品质的相关性研究
引言
活血丹Glechoma longituba (Nakai) Kupr.为唇形科活血丹属多年生植物，其干燥地上部分在春至秋季 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ￥351916072$ 
采收、除去杂质、晒干后入药，药材名连钱草。连钱草性微寒，味辛、微苦，归肝、肾和膀胱经；具有利湿通淋、清热解毒、散瘀消肿的功能[1]；广泛应用于尿路结石、肝结石、痛经、子宫炎等病症的治疗[2]，市场需求随使用而增加。目前对活血丹的研究集中在活血丹化学成分、药理作用[35]，有报道活血丹中三萜酸类成分主要含有熊果酸和齐墩果酸；而咖啡酸、绿原酸、迷迭香酸等则是活血丹中主要的酚酸类成分。刘杰等[6]从活血丹干燥全草的95%乙醇提取物中首次分离得到阿魏酸乙酯、反式对羟基肉桂酸等化学成分。陶勇等[7]发现活血丹地上部分的水提物和挥发油提取对细菌有明显的抑制作用。此外也有环境对活血丹药材品质影响的报道，如邹俊等[8]提出中性或微酸性土壤能显著提高活血丹的药材品质。然而，由于次生环境的破坏，如不合理的滥用，环境污染等原因，活血丹的野生资源退化，产量下降，急需规范化栽培[910]。
土壤酶主要来源于土壤微生物活动分泌、植物根系分泌和植物残体以及土壤动物区系分解[11]，在维持碳、氮、氧、磷等元素的生物化学循环中起着重要作用，并且为植物的健康发育提供肥料支持[12]。土壤酶涉及碳循环相关酶、氧化相关酶和氮磷代谢相关的酶，其中土壤脲酶催化尿素水解成氨，能促进有机质分子中肽键的水解，可用来表征土壤中有机态氮的转化状况；土壤蛋白酶参与土壤中氨基酸、蛋白质及含氮有机化台物的酶解，可将蛋白质水解为肽，最终形成氨基酸为植物提供氮源[13]，参与调节生物的氮素代谢，是促进土壤氮循环的重要组分[14]；土壤磷酸酶有酸性磷酸酶、中性磷酸酶和碱性磷酸酶，在土壤中起作用的主要是酸性磷酸酶，植物根系分泌酸性磷酸酶活性的增加又能够水解释放土壤中的有机磷化合物供植物生长，酸性磷酸酶在调控植物磷营养方面有着非常重要的作用，它在有机磷的代谢及再利用过程中也起着十分重要的作用。
本论文通过活血丹植株指标性成分含量与其种源地土壤中氮磷循环相关酶的酶活测定，分析了土壤中磷酸酶、脲酶和蛋白酶等活性和活血丹指标性成分的相关性，可为活血丹的栽培技术优化提供理论依据。
1材料与方法
1.1试验材料
试验所用活血丹Glechoma longituba (Nakai) Kupr.经大学中药材研究所郭巧生教授鉴定。2018年9月在对活血丹分布统一调研后，选择将军山、紫金山、珍珠泉、上峰、栖霞山5地作为采样点，每个采样点均采用5点法采样。取样时选取生长健壮的活血丹植株，洗净、晾干、放入55℃烘箱烘干至恒重、打粉、过60目筛后于阴凉干燥处保存备用；同期在活血丹着生地距地面20 cm取根际土壤样品，去除石头等杂物，风干后于4℃保存备用。
1.2活血丹药材指标性成分测定方法
活血丹地上部分采收后，洗净，晾干，然后放入烘箱55℃烘干至恒重，用打粉机打粉，过60目筛，进行化学成分的测定。
1.2.1醇溶性浸出物含量测定 按照《中华人民共和国药典一部》醇溶性浸出物测定法（通则2201）项下的热浸法进行测定，用50%乙醇作为溶剂。取活血丹样品约2 g，精密称定，置于100 mL的锥形瓶中，加入50%乙醇50 mL，密塞后称重，静置1 h，热回流1 h。冷却再称重，用乙醇溶液补足重量后过滤，精密称取滤液25 mL于蒸发皿中，水浴锅上蒸干溶液，105℃的烘箱中干燥3 h，冷却后精密称重。醇溶性浸出物的含量（%）以干燥品计算样品中所含量。
1.2.2总黄酮含量测定 总黄酮含量采用分光光度法测定。标准曲线制定：精密称取0.1 g芦丁对照品置于离心管中，加入6 mL60%乙醇后得芦丁对照品溶液，精密取芦丁对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.2、1.6 mL分别置于7个25 mL容量瓶中，加入8 mL 1.5%氯化铝溶液和4 mL pH5.5的醋酸钠醋酸缓冲液后用60%的乙醇定容。以60%的乙醇为对照，420 nm波长下检测吸光度，并对芦丁含量和吸光光度值进行回归处理，绘制标准曲线（y=0.2024x0.0144 R2=0.9731 n=3）。样品测定：精密称取活血丹干燥粉末0.1 g，加入6 ml60%乙醇溶液，超声下提取80 min。取出静置冷却至室温，25℃、4000 rmin1条件下离心10 min，上清液即为活血丹样品液。精密量取样品液1 mL置于25 mL容量瓶中，加入8 mL 1.5%氯化铝溶液和4 mL pH5.5的醋酸钠醋酸缓冲液，进行显色反应，同样以60%的乙醇作为空白对照，在420 nm波长下测定吸光值，并根据回归方程计算活血丹样品中的总黄酮含量。

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