目的研究黄芪对蚂蟥生长和免疫的影响。方法在蚂蟥养殖水中添加黄芪，使养殖水中黄芪浓度分别为0‰，0.1‰，0.3‰，0.5‰，0.7‰，0.9‰。养殖60天后采用3，5-二硝基水杨酸比色法测得其淀粉酶活力、采用对棕榈酸硝基苯酯（ρ-NPP）比色法测得其脂肪酶活力、采用福林酚比色法测得其蛋白酶活力、采用考马斯亮蓝G-250比色法测得其组织匀浆液蛋白含量，并采用邻苯三酚自氧化法测得超氧化物歧化酶（SOD）活力、采用比色法测得过氧化氢酶（CAT）活力、碱性磷酸酶（AKP）活力。结果黄芪组最终体重、增重率和特定生长率、消化酶和抗逆酶活性均高于空白组，且随浓度的增加呈先升后降趋势，其中浓度0.5‰组显著高于其他组别（P＜0.05）；黄芪组与空白组蚂蟥内在品质无显著性差异。综上，黄芪能提高蚂蟥消化酶、抗逆酶活性，促进蚂蟥生长、提高免疫能力。建议在蚂蟥实际生产中添加0.5‰黄芪以提高养殖效益。
目录
摘要3
关键词3
Abstract3
Key words3
引言3
1 材料4
1.1 实验材料 4
1.2 主要实验仪器和试剂 4
2 方法4
2.1 实验设计4
2.2 生长性能的测定4
2.3 消化酶和抗逆酶活性的测定4
2.4 蚂蟥内在品质的测定5
2.5 数据分析5
3 结果与分析 5
3.1 黄芪对蚂蟥生长性能的影响 5
3.2 黄芪对蚂蟥消化酶的影响 5
3.3 黄芪对蚂蟥抗逆酶的影响 6
3.4 黄芪对蚂蟥内在品质的影响6
4 讨论6
4.1 黄芪对蚂蟥生长的影响6
4.2 黄芪对蚂蟥免疫的影响7
4.3 黄芪对蚂蟥内在品质的影响8
5 总结8
致谢8
参考文献9
黄芪对蚂蟥生长和免疫及内在品质的影响
引言
蚂蟥Whitmania pigra Whitman也被称为宽体金线蛭，是2015年版《中国药典》中药材水蛭的主要基原动物，具有治疗中风、高血压、清瘀、闭经、 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072* 
跌打损伤等功效[1]。它是治疗心脑血管疾病中成药的主要原料。随着对蚂蟥需求的增加和野生蚂蟥资源的消耗，蚂蟥的人工养殖需求迫在眉睫。经过多年研究，蚂蟥的人工养殖已取得初步成果。然而，在养殖过程中，蚂蟥的生长受到水质，温度，病菌等许多不可控因素的影响，导致成活率低，生长缓慢等现象，严重降低了蚂蟥人工养殖的经济效益和养殖产出。因此，提高蚂蟥养殖技术、探索出能够改善蚂蟥生长性能和免疫能力的方式迫在眉睫。
蒙古黄芪Astragalus membranaceus Hsiao是《中国药典》2015版中药材黄芪的主要基源植物之一。具有补气固表、利尿、脱毒排浓、生肌等功效[1]。黄芪对哺乳动物的影响已有了广泛的研究，它可以提高动物免疫力和改善肝细胞功能[24]。 在水产方面的研究中，黄芪可以增强施氏鲟Acipenser schrencki、大黄鱼Larimichthys crocea和瓯江彩鲤Cyprinus carpiovar.color的免疫力、抗感染能力以及生长性能[59]。此外，在蚂蟥生物特性等方面也多有研究[1015]。但黄芪在蚂蟥的人工养殖方面的应用还没人研究。本研究在室温下以不同浓度的黄芪处理人工喂养下的蚂蟥为基础，通过蚂蟥添加黄芪后存活率、增重率、消化酶（淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶）和抗逆酶（SOD、CAT、AKP）的活性来评价黄芪对蚂蟥生长和免疫的影响，为蚂蟥人工养殖技术的改进、促进蚂蟥养殖的产出提供理论依据与指导。
1 材料
1．1 实验材料
蚂蟥（1月龄），由大学中药材研究所提供，黄芪（1年生），产地为内蒙古乌兰察布市，经郭巧生教授鉴定为蚂蟥Whitmania pigra Whitman和蒙古黄芪Astragalus membranaceus Hsiao。
1．2 主要实验仪器和试剂
GZX智能型光照培养箱（宁波江南仪器厂）、756CRT紫外分光光度计（上海精密仪器有限公司）、FW100小型高速粉碎机（天津华鑫仪器厂）、HHS型水浴锅（巩义市予华仪器有限责任公司）、FA1104分析天平（上海精科天平）、电子天平（山海精密仪器厂）、5810R离心机（Eppendorf）。
二硝基水杨酸（DNS）、钼酸铵、福林酚、干酪素、对硝基苯磷酸二钠、3，5二硝基水杨酸、对棕榈酸硝基苯酯（ρNPP）、G250考马斯亮蓝、邻苯三酚。
2 方法
2．1 实验设计
本实验在室温为27±1℃室内进行，将体重0.16±0.03g健康蚂蟥养殖在2L塑料瓶，每瓶10条。设1个空白对照组和5个黄芪浓度组，使养殖水中黄芪浓度分别为0‰，0.1‰，0.3‰，0.5‰，0.7‰，0.9‰。每组10瓶，饲养管理条件相同，养殖60天称量蚂蟥体重，每组随机取20条蚂蟥放在冰块上解剖取消化道，进行相关酶活的测定，同时将解剖后蚂蟥阳光下晾干，做内在品质的测定。
2．2 生长性能的测定
60天养殖实验结束后，根据以下公式计算蚂蟥特定生长率（SGR）、存活率（SR）、增重率（WGR）。式中W0为实验开始时蚂蟥的平均质量（g），实验天数为t（d），W1为实验结束时蚂蟥的平均质量（g）。
SR（%）=100×（总条数死亡条数）/总条数。
SGR（%）=100×（lnW1lnW0）/t；
WGR（%）=100×（W1W0）/W0。
2．3 消化酶和抗逆酶活性的测定
用预冷的蒸馏水洗净，吸干消化道组织表面水分，冰浴中匀浆，加蒸馏水，稀释成含原浆20%的溶液，4 ℃离心15 min（转速为8 000 rmin1），所得上清液为酶液。
淀粉酶活力采用3，5二硝基水杨酸比色法，在37 ℃条件下，单位体积的酶量1 min水解淀粉生成1 mg还原糖的产量为1个淀粉酶活力单位。脂肪酶活力采用对棕榈酸硝基苯酯（ρNPP）比色法，1 min催化释放1 μmol对硝基酚的酶量定义为1个酶活力单位；蛋白酶活力采用福林酚比色法，在37 ℃和已定pH条件下，每分钟水解干酪素产生1 μg酪氨酸定义为1个蛋白酶活力单位。组织匀浆液蛋白含量采用考马斯亮蓝G250比色法。[16,17]
超氧化物歧化酶（SOD）活性采用邻苯三酚自氧化法[18]；过氧化氢酶（CAT）活性采用比色法[19,20]；碱性磷酸酶（AKP）活性采用比色法[21]；定义每毫克可溶性酶蛋白所具有的酶活力单位数（Umg1）为1个酶比活力。
2．4 蚂蟥内在品质的测定

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