【目的】通过离体诱导获得素花党参同源四倍体植株，为进一步开展素花党参同源四倍体新品种的选育提供实验材料。【方法】不同浓度细胞分裂素与细胞生长素配比优化素花党参无菌快繁体系，并使用浓度为0.05%、0.1%、0.2%的秋水仙素，分别浸泡处理素花党参顶芽12h、24h、36h、48h进行四倍体离体诱导，采用形态鉴定、气孔鉴定和流式细胞仪鉴定的方法鉴定倍性。【结果】经过形态鉴定、气孔鉴定和流式细胞仪鉴定共获得10个素花党参同源四倍体株系。素花党参最佳增殖培养基为MS+6-BA0.30mg·L-1+NAA0.05mg·L-1；同源四倍体诱导的理想条件是0.05%秋水仙素溶液处理顶芽48h，诱导率为10.71%；与二倍体相比，四倍体植株叶片变大、气孔增大、气孔密度减小；流式细胞仪鉴定结果显示二倍体植株DNA相对含量为201.6，四倍体植株DNA相对含量为399.7。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1 材料 2
1.2 方法 2
1.2.1 素花党参无菌快繁体系的建立与优化2
1.2.2 同源四倍体离体诱导2
1.2.3 诱导后生根2
1.2.4 同源四倍体鉴定2
2 结果与分析3
2.1 快繁培养基的优化3
2.2 秋水仙素对素花党参的诱导结果4
2.3 生根效果4
2.4 倍性鉴定5
2.4.1 形态鉴定5
2.4.2 气孔鉴定5
2.4.3 流式细胞仪鉴定6
3 讨论 7
3.1 快繁培养基的优化7
3.2 诱导方法的选择7
3.3 素花党参的壮根问题7
3.3.1 形态鉴定7
3.3.2 气孔鉴定8
3.4 鉴定方法的选择8
致谢8
参考文献9
素花党参同源四倍体的离体诱导与鉴定
中药学 卢芳
引言
素花党参Codonopsis p *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: @351916072@ 
ilosula Nannf. var. modesta( Nannf. ) L. T. Shen 以其干燥根入药，具有补中益气、生津和胃等功效[1]。素花党参主要分布在甘肃、四川和陕西等省区[2]，其中以甘肃文县所产的素花党参品质最佳[3]。甘肃文县栽培的素花党参，商品名为“纹党”，因其种子、种苗异地引种不能保持优良品质和特性，故为文县特产[4]。市场上常按党参的芦头大小、药材长度划分等级，优质党参芦头大药身长。近年来，农户利用较好的种植技术以及使用农药化肥，使得党参药材外观粗壮，但有效成分含量的高低却不明确，甚至有调查研究发现纹党出现商品等级越高，而综合质量越差的情况[5]。
多倍体育种可以通过化学诱变获得染色体加倍植株。由于多倍体植株染色体组数量增多，使得基因模板增加，而合成更多的酶蛋白，增加了酶的整体催化活性，促使植物新陈代谢旺盛，合成有机物的速率增加[6]。研究发现，多数多倍体中次生代谢产物的含量都有所增加，如紫锥菊四倍体与二倍体相比，菊苣酸、绿原酸含量明显增加[7]；杭白芷多倍体中欧前胡素含量是原植物的2倍[8]。因此，有望通过多倍体育种的方式提高纹党参内在活性成分的含量。党参多倍体育种研究，自1991年《中草药》首次报道之后[9]，在近30年时间里鲜有报道，且都是对潞党参进行诱导[1011]。本研究在建立素花党参无菌快繁体系的基础上，以秋水仙素作为诱导剂，进行素花党参同源四倍体的离体诱导，为进一步开展素花党参同源四倍体优良品种的选育提供材料，本项工作具有的一定的科研意义。
1 材料与方法
1．1 材料
1．2 方法
1．2．1 素花党参无菌快繁体系的建立与优化 素花党参种子流水冲洗30min，再用75％酒精消毒30s，转入0.1％HgCl2溶液灭菌约5min，后用无菌水清洗3~4次，接入MS培养基，建立无菌系。设置不同浓度细胞分裂素（6BA）与细胞生长素（NAA）配比，筛选最适宜的增殖培养基，试验设计见表1。每个处理重复5次，1500~2000lx光照12h，25±1℃培养30d后统计丛生芽增殖系数和丛生芽高度。
1．2．2 同源四倍体离体诱导 秋水仙素采用高压蒸汽灭菌。切取素花党参顶芽0.5~1cm，浸泡在不同浓度秋水仙素溶液中分别处理不同时间，秋水仙素溶液设置浓度梯度为0.05％、0.10%、0.20%，诱导时间分别为12h、24h、36h、48h，无菌水清洗3~4次，接入MS培养基。共设置12个处理，每个处理50个顶芽，1500~2000lx光照12h，25±1℃条件下培养30d，统计不同条件处理下顶芽存活率。
1．2．3 诱导后生根 诱导后接入MS培养基的素花党参幼苗长至5cm左右，切取顶芽，分别进行生根培养和无糖组培。生根培养基采用1/2MS+IAA 1.0mgL1+ NAA 0.5mgL1，将顶芽接入该培养基中进行生根、壮根。无糖组培方法为：称取蛭石450g，加水550ml，拌匀，灭菌；量取大量元素50ml、微量元素5ml、铁盐5ml，定容至1L，调pH至5.8，装瓶、灭菌；在超净工作台内先装约3cm厚的蛭石，再倒入500ml配好的营养液；顶芽接入该无糖培养基中，接种后第一天不照光，前面35天缓苗，暂不通气，之后开始通气。
1．2．4 同源四倍体鉴定 经秋水仙素诱导后的素花党参经生根培养后，采用形态鉴定、气孔鉴定和流式细胞仪鉴定的方法，进行倍性鉴定。
（1）形态鉴定 从叶色、叶面积、茎粗细等外部特征初步筛选四倍体植株。
（2）气孔鉴定 上午9:00取材，每植株随机选取上、中、下各1片叶，滤纸打湿后包裹新鲜叶片以保湿，在1h内完成气孔观察。用透明指甲油均匀涂在叶片背面，在指甲油干燥后轻轻撕取指甲油膜，用连续变体显微镜，在10×8倍镜下随机观察3个视野，重复3次，记录每视野气孔数目。每视野随机选取三个气孔，测量气孔长度和宽度。

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