目的探究不同浓度甲基睾酮（MT）对蚂蟥性腺发育和内源激素含量的影响。用甲基睾酮分浓度梯度对同一居群的5月龄蚂蟥进行浸浴法处理，测定蚂蟥的生物学指标，计算雌、雄性腺指数（GSI），运用高效液相色谱串联质谱法研究MT处理后对蚂蟥体内性腺发育相关的内源雄激素、雌激素、孕激素含量的影响。结果显示，经外源MT处理后，与空白组相比，蚂蟥的体重先上升后下降，雄性腺指数升高，雌性腺指数下降。蚂蟥体内的睾酮含量上升，而甲基睾酮含量变化显著，随浓度增加呈现先上升后下降的趋势（P<0.05）。雌酮及雌三醇含量显著升高（P<0.05），且都在最高浓度组处达到最大值。黄体酮含量略微升高，低浓度组变化不显著（P<0.05）。综上，中低浓度的MT对蚂蟥的体重、性腺发育、内源性类固醇激素起到促进作用，高浓度的MT则产生抑制作用。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1实验材料与方法2
1．1 实验材料2
1．1．1 材料和试剂2
1．1．2 主要仪器和设备2
1．2 方法2
1．2．1 实验设计2
1．2．2 体重测定3
1．2．3 激素测定3
1．2．4 色谱与质谱条件3
1．2．5 数据分析3
2 结果与分析3
2．1 不同浓度甲基睾酮对蚂蟥体重的影响4
2．2 不同浓度甲基睾酮对蚂蟥性腺的影响4
2．3 不同浓度甲基睾酮对蚂蟥内源雄激素的影响4
2．4 不同浓度甲基睾酮对蚂蟥内源雌激素的影响5
2．5 不同浓度甲基睾酮对蚂蟥内源孕激素的影响5
3 讨论 6
3．1 甲基睾酮对蚂蟥生长的影响 6
3．2 甲基睾酮对蚂蟥性腺的影响 6
3．3 甲基睾酮对蚂蟥体内雄激素的影响6
3．4 甲基睾酮对蚂蟥体内雌激素的影响7
3．5 甲基睾酮对蚂蟥体内孕激素的影响7
致谢8
参考文献8
甲基睾酮对蚂蟥性腺发育及内源性类固醇激素的影响< *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ￥351916072$ 
br /> 引言
蚂蟥Whitmania pigra Whitma，学名水蛭，又名宽体金线蛭[1]，水蛭科动物，又名性咸、苦，归肝经，是中国传统的特种药用水生动物，其干制品泡制后中医入药，具有破血通经，逐瘀消症的功效，用于血瘀经闭，瘾瘕痞块，中风偏瘫，跌扑损伤[2]。2015版《中国药典》中药水蛭的基原收载有3种：日本医蛭（Hirudo nipponia Whitman）、蚂蟥（Whitmania pigra Whitma）和柳叶蛭（Whitmania acranulata Whitman）。目前大量用于制中成药的主要为宽体金线蛭的干燥体，近几年通过对蚂蟥基础生物学、消化生理、呼吸生理等方面的研究[36]，蚂蟥人工养殖初步获得成功，同时发现蚂蟥是体内同时存在雌雄两套生殖系统的“同步性雌雄同体”动物[7]，由于其特殊的生物学特性，雌雄性腺发育分期与现知的分期不同，其精卵细胞有序发育同步成熟。
研究表明生殖细胞受性类固醇激素的影响，生物体的性别分化和性腺发育均受到外源激素一定程度的控制，雄激素在动物生殖发育过程中的重要性毋庸置疑。睾酮是最主要也是活性最强的雄性激素，雄激素效应明显，对动物的生长发育普遍能产生性逆转影响，形成雄性第二特征。
早在20世纪70年代, Reinboth[8]首先对雌雄同体、雌性先熟的海洋鱼类用雄激素处理诱发性转化和提早成熟做过评论。此后，国内外不少学者开始从事水生动物的性转化方面的研究。林家豪等[9]通过对雌性黄姑鱼研究发现，用17α甲基睾酮（MT）进行浸浴处理可使其转化成伪雄鱼，均出现性逆转现象。韩建等[10]对产后雌性剑尾鱼研究发现，17α甲基睾酮对产后雌鱼有明显的影响，受诱导后出现性逆转，逐渐发育形成雄性第二性征。刘少贞等[11]对麦穗鱼研究发现，用甲基睾酮进行处理，雄鱼性腺出现精卵巢现象，50ng/L的甲基睾酮对麦穗鱼的性腺指数和性腺组织学影响最为显著。Chao[12]等通过埋植甲基睾酮4个月诱导巨石斑鱼性转化，洪万树[13]等在饲料中添加甲基睾酮投喂赤点石斑鱼50天，均能诱导性转化，获得功能性雄鱼。在诱导许多海洋鱼类的转雄实验中，甲基睾酮已被证明是一种有效的诱导剂，在自然性逆转发生之前任何年龄阶段处理都可诱导转雄。
目前，虽然甲基睾酮在许多水生动物性腺分化，生殖细胞发育方面的研究已经有了很大的进展，也取得了极大的成功，但蚂蟥作为一类特殊的雌雄同体的水生动物，关于甲基睾酮对其性腺分化，生殖发育方面的研究还未出现过具体科研资料，而除此以外，外源雄激素对于内源性类固醇激素含量产生的影响也未出现过系统的研究。本课题通过研究不同浓度的甲基睾酮对蚂蟥体内性腺发育相关激素含量的影响，为蚂蟥生殖发育方面的研究提供科学依据和理论参考，在促进蚂蟥生产方面也起到积极作用，实验旨在通过采用高效液相色谱串联质谱的方法检测经过甲基睾酮浸浴法处理后蚂蟥体内性类固醇激素的含量，为进一步探究甲基睾酮在蚂蟥体内的作用机理提供科学依据。
1 实验材料与方法
1．1 实验材料
1．1．1 材料和试剂
实验用蚂蟥由大学中药材研究所蚂蟥实验室提供，经郭巧生教授鉴定为蚂蟥Whitmania pigra Whitman；实验所用螺蛳（采自南京玄武湖，野生）为梨形环棱螺Bellamya purificata Heude。液氮，无水乙醇，叔丁基甲醚，Na2CO3溶液，甲醇溶液，乙腈溶液。
1．1．2 主要仪器和设备
分析天平（FA 1104型，上海精密科学仪器有限公司），旋涡混匀器（HYQ2121A型，苏州捷美电子有限公司），超声波发生器（JXDP03型，北京博朗德科技有限公司），圆形水浴氮吹仪（YYDCY12Y型，上海允延仪器有限公司），循环水式多用真空泵（SHZIII型，临海市潭氏真空设备有限公司），高速离心机（XZ16T型，长沙湘智离心机有限公司），高效液相色谱仪（1200系列，美国安捷伦公司），电喷雾飞行时间质谱仪（美国Applied Biosystems公司）。

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