甘草组织培养及同源四倍体诱导初步鉴定【字数：9172】
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1 材料与方法2
1.1 材料2
1.2 方法 2
1.2.1甘草无菌体系建立 2
1.2.2甘草无菌快繁体系的优化 2
1.2.3甘草愈伤组织再分化 2
1.2.4四倍体诱导方法 3
1.2.5诱导后材料继代生根 3
1.2.6形态学以及气孔保卫细胞的观察鉴定 3
2 结果与分析3
2.1温水浸种对甘草种子萌发的影响 3
2.2不同培养基对甘草茎段分化的影响3
2.3不同长度茎段对甘草腋芽丛生芽诱导的影响5
2.4愈伤组织再分化途径5
2.5四倍体诱导结果 6
2.6诱导后材料继代生根 6
2.7诱导后植株的形态鉴定及气孔保卫细胞观察 7
3 结论与讨论 7
3.1甘草种子水浸液萌发中的问题 7
3.2植物生长调节剂6BA与NAA在组培快繁中的问题 8
3.3甘草组培快繁中的褐化问题 8
3.4甘草诱导四倍体过程中的问题 8
致谢9
参考文献9
甘草 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: @351916072@
组织培养及同源四倍体诱导初步鉴定
中药学 成婧荷
引言
甘草又名国老、灵通、甜草、棒草，为豆科植物甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch.（又名乌拉尔甘草）、胀果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L. 的干燥根及根茎[1]。性味甘平，归心、肺、脾、胃经，可补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药[2]；主要用于脾胃虚弱、咳嗽痰多、脘腹胀痛、痈肿疮毒等症。
甘草主要活性成分是甘草酸、甘草甜素、甘草皂苷等，具有抗溃疡、抗炎、解痉、抗氧化、抗病毒、抗癌、抗抑郁、保肝、祛痰和增强记忆力等多种药理活性[3]。在现代食品生产中，甘草提取物中作为甜味剂、抗氧化剂、抗菌剂、起泡剂和增味剂等广泛用于饮料、啤酒、肉类等食品，是欧盟、美国、中国等认可的食品添加剂[4]。除此之外，甘草提取物还在化妆品、轻工业、饲料等行业广泛应用。甘草是荒漠半荒漠地区一种重要的防风固沙植物[5]，近年来随着甘草的生态效益，经济效益等不断的加大，市场对甘草的需求也迅速猛增，导致了野生甘草采挖严重，野生资源逐渐消耗殆尽等问题。此外，由于甘草在栽培条件下4～5 年才能收获种子，而利用地下根茎进行营养繁殖的繁殖系数较低，这些都限制了甘草的育种工作[6]。已有的核型研究表明甘草染色体数目为2n=16，有关该物种在自然界发生变异的情况未见报道[79]。植物组织培养是开展植物育种以及植物离体保护的一种重要手段，同时，诱导再生的四倍体甘草经过抚育后可形成高产量优良植株，有效成分含量明显增加，马文芳等[10]实验研究表明，不同外植体愈伤组织细胞染色体加倍率与甘草酸和甘草黄酮呈正相关，且相关系数均达到显著水平，说明倍性改变能影响甘草酸与甘草黄酮量的积累，对中药提取行业有着巨大的贡献。实现四倍体育种，组织培养即为一种很有效的方式。本实验利用甘草种子建立无菌系，在优化快繁技术体系的基础上采用不同浓度时间组合的秋水仙素诱导处理丛生芽，诱导甘草同源四倍体，为进一步开展品种选提供技术支持和育种材料。
1 材料与方法
1.1实验材料
1.2 实验方法
1.2.1甘草种子水浸液建立无菌体系
挑选粒大饱满的甘草种子作为外植体，在40℃的水浴锅中恒温浸种30min左右，将处理好的甘草种子用洗洁精揉搓清洗后用自来水充分冲洗。在超净工作台中用75%乙醇溶液消毒30s，再用0.1%的氯化汞溶液消毒5min，无菌水冲洗3～5次。接种在不含激素的MS培养基中，每瓶5粒，共40瓶，在25℃光照培养室中黑暗下培养一周左右，待子叶片展开时在光照1000～1600lx条件下培养，备用。
1.2.2甘草无菌快繁体系的优化
取生长15d的甘草无菌苗茎段，长度分别为0.7、1.5、2.5cm。以MS为基本培养基，加入蔗糖30g﹒L1，琼脂7.5～8g﹒L1，调节pH至5.8～6.0。将不同长度茎段在无菌操作台中接种至培养基M1～M6（表1）。实验设计参照表2、表3，共4个因素，6种水平。25℃，光照1000～1600lx，培养20天后，观察幼苗分化情况，统计分化率与增殖系数等。
1.2.3甘草愈伤组织再分化
将形成有愈伤组织的植株在愈伤组织形成7d以后转接至不添加任何激素的MS培养基中进行再分化培养，如见愈伤组织底部褐化，及时切除转接至MS培养基中。10d后观察愈伤组织的再分化情况，统计再分化形成的芽数。
表1 分化培养基配方
种类 编号
配方
分化培养基 M1
M2
M3
M4
M5
M6
生根培养基 M7
M8
原文链接：http://www.jxszl.com/yxlw/zyx/561515.html
