摘 要植物内生真菌是指在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康之物内的各种组织和器官内部的真菌和细菌，他们长期生活在植物体内特殊的环境中并与宿主协同进化。内生菌在农业、医药领域有着巨大的应用潜力，因而受到人们广泛关注。本实验利用组织分离法对药用植物女贞叶内生真菌进行分离，采用菌丝顶端纯化法对其内生真菌进行纯化。实验结果表明，从女贞叶内分离得到14株内生真菌，经初步鉴定为6属。结果表明，女贞叶内含有丰富的内生真菌，通过本次实验，为以后利用女贞内生真菌资源鉴定了基础。目 录
1 前言
1.1 内生真菌研究现状 1
1.1.1 内生真菌的定义 1
1.1.2 内生真菌重要的几类药用活性物质 1
1.1.3 内生真菌生物学作用 2
1.1.4 我国内生真菌的研究现状及发展趋势 3
1.2 女贞叶的研究概况 4
1.2.1 女贞叶的简介 4
1.2.2 女贞叶在医药方面的研究 4
1.2.3 女贞叶在食品保健方面的应用 5
1.2.4 女贞叶在环境保护方面的应用 5
1.2.5 女贞叶药理作用研究 6
1.3 植物内生真菌的研究与展望 6
2 实验内容
2.1 材料与方法 7
2.1.1 植物样品 7
2.1.2 主要试剂 7
2.1.3 培养基 7
2.1.4 仪器与设备 7
2.1.5 试验方法 7
2.2 结果与分析 10
2.2.1 表面消毒效果的检查 10
2.2.2 女贞叶内生真菌的分离鉴定结果 10
3 讨论
3.1 植物内生真菌分离过程中用来进行表面灭菌的方法 12
3.2 植物内生真菌的分离纯化技术 12
参考文献 13
致 谢 15
1 前言
1.1 内生真菌研究现状
1.1.1 内生真菌的定义
内生真菌（endophytic fungi）指是在宿主植物的茎和叶内生存并完成生活周期的真菌
 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ^351916072* 
.1 植物内生真菌分离过程中用来进行表面灭菌的方法 12
3.2 植物内生真菌的分离纯化技术 12
参考文献 13
致 谢 15
1 前言
1.1 内生真菌研究现状
1.1.1 内生真菌的定义
内生真菌（endophytic fungi）指是在宿主植物的茎和叶内生存并完成生活周期的真菌。这类真菌中，有许多种类，很少形成孢子，或者在宿生植物上形成的孢子（或者孢子果）不容易识别。真菌感染植物组织，菌丝存在于细胞内和细胞间。与病原菌不同，这些真菌对宿主植物几乎没有害处，它们和植物之间或者是相互依存的共生关系，或者是不太密切的共生关系。健康植物的根、茎、叶中含有丰富大量的内生真菌。实验时对植物组织进行严格表面消毒是为了保证得到的真菌为植物的内生真菌。植物内生真菌主要在药用植物、羊茅属植物、热带树木中研究较多。
1.1.2 内生真菌重要的几类药用活性物质
1.1.2.1 生物碱类
长春新碱具有抗肿瘤活性。云南大学张玲琪[1]等对多种植物如桃儿七、长春花等内生真菌展开研究,发现了多种内生真菌能产与宿主相同或相似的抗肿瘤物质。尤其对白血病、恶性淋巴瘤具有显著疗效。喜树碱属于喹啉类生物碱，是第二个获准上市的具有抗癌活性的天然产物。陈贤兴[2]等从喜树果实中分离得到了一株产喜树减衍生物的内生真菌。
1.1.2.2 萜类
目前已经被看作为现在自然社会中广谱、活性最强的抗癌药物为紫杉醇。自1993年Strobel等人从短叶红豆杉的树皮中中分离出一株内生真菌能产生抗肿瘤药物紫杉醇后从云南红豆杉树皮中也分离出一株具有产紫杉醇能力的内生真菌；从南方红豆杉中分离得到6株具有产紫杉醇类化合物的内生真菌[3]。这类有效部分被证明存在明显的抗癌、抗菌、抗氧化等作用。在临床上主要应用于子宫癌、卵巢癌、乳腺癌等，并且具有特殊疗效。
1.1.2.3 醌类
粗榧酸为一种苯醌二聚物，其活性比蛋白激酶激动剂强，其具有较大的抗肿瘤作用。在一株分离自佛罗里达榧树的内生真菌代谢产物中已发现该化合物[4]。Brady等从Conocarpuserecta L.的内生真菌Cytoapora sp.中分离可以得到两个双蒽醌类化合物，本研究展露出其中之一Cytoskyrin A在体外可以抑制DNA合成和转录[5]。
1.1.2.4 木脂素类
一类天然木脂素为鬼臼毒素。目前已从桃儿七等植物中可以得到产鬼臼毒素的产物及其衍生物[6]。其被常常用于治疗皮肤癌及抵御某些病毒[7]。
1.1.2.5 环肽类
wiffordii中分离得到的内生真菌栎树拟隐孢壳Cryptosporiopsiscf．Quercina可以形成新型环肽抗生素——cryptocalldin，其抗菌作用主要针对癣菌及白色念珠菌 [8]。另外，从苦皮藤内生真菌中分离得到的环肽类抗生素Eniatinns类化合物，其对玉米大斑病菌、番茄早疫病菌、烟草赤星病菌等植物病原真菌菌丝生长和孢子萌发抑制率很大[9]。
1.1.2.6 其他类
在北美红杉内生真菌寄生曲霉中分离出SequoiatonesA、B，其对60种肿瘤细胞都会存在中等强度的细胞毒活性，尤其对乳腺癌细胞的毒性较强[10]。
除此之外，在研究植物的过程中还发现有其他化合物的存在，如多糖等。这些化合物对植物抗体的形成也有一定的影响。其发挥抗癌活性是通过恢复和提高患者的免疫功能。若与其他药物联合使用，还能减少化疗药物带来的毒副作用，以来增强疗效。
1.1.3 内生真菌生物学作用
由于内生真菌能够产生多种活性物质和自身的代谢产物对植物施加影响，使其具有重要的生物学活性。
1.1.3.1 对宿主植物生长有促进作用
对被感染内生真菌和未感染内生真菌的同种植株进行观察发现，前者比后者生长速度快，表现在植物生长发育的多个方面，内生真菌都能不同程度的起到一定的促进植物生长发育作用。究其原因，是因为许多内生真菌寄生于植物体内，可以合成一些化学物质，如IAA，生长素，赤霉素以及细胞激动素等，而这些正是植物生长所需的调节物质，能直接促进宿主植物吸收S，P等营养元素。
1.1.3.2 对宿主的抗逆性有增强作用
对被感染内生真菌和未感染内生真菌的同种植株进行观察发现，前者比后者在抗逆性方面表现明显的优势，前者可增强宿主的抗逆性，具体表现为：第一，植物耐高温，抗干旱以及抗酸碱能力显著提高等；第二，对抵抗病虫害，阻抑昆虫和食草动物的采食方面也表现明显优势。产生这样的结果，主要是因为寄生在植物体内的内生真菌产生了多样的次生代谢产物，如黑麦草碱，麦角碱，波胺和覃青毒素等，这些次生代谢物对食草动物和昆虫具有毒性，因而能提高植物对多种食草昆虫的抗性[1114]。
1.1.3.3 对植物的他感作用增强
研究发现，被内生真菌感染了的牧草，其生存能力大为增强，导致的结果是这样的牧草连年蔓延，其他的植物就失去了生存的空间，最终死亡。主要是因为内生真菌能够产生毒麦碱，对邻近未感染内生真菌产生他感作用，使其不能生长。
1.1.3.4 其他作用
某些真菌侵入宿主细胞后，在特定的环境和生理条件下刺激宿主产生在正常情况不能产生的小分子物质，促进宿主体内次生代谢物的形成和积累，也能将植物体内源和外源的化学物质转化为另类物质。如江东福等以柬埔寨龙血树（Dracaena co
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