目录
摘 要 I
ABSTRACT II
引言 1
第一章 文献综述 2
1 卵巢中卵泡及血管的发育 2
1.1 卵巢卵泡发育 2
1.2 卵巢卵泡血管发育 2
2 卵巢血管发育主要调控因子 2
2.1血管内皮细胞生长因子 3
2.2低氧诱导因子1 2
2.3 HIF1对VEGF的调控作用 3
3 褪黑素 4
3.1 褪黑素及其合成降解 4
3.2 褪黑素受体及其作用机制 4
4 昼夜节律与卵巢生物钟 4
5 褪黑素调控小鼠卵巢血管发育 5
5.1 调节激素分泌途径的调控 5
5.2 抗氧化途径的调控 6
6 结语 6
第二章 材料与方法 7
1 试验材料 7
1.1 样品 7
1.2 试剂 7
1.3 仪器 7
2 试验方法 7
2.1 实验动物处理与昼夜紊乱小鼠模型建立 7
2.2 qRTPCR检测卵巢发育相关基因mRNA表达 8
2.3 卵泡血管情况鉴定 11
第三章 结果与分析 13
1 不同处理组血清中褪黑素浓度 13
2 不同处理对卵巢血管发育相关基因表达量的影响 13
3 不同处理对卵巢卵泡周围血管发育的影响 15
3.1 大卵泡（大于250 μm）周围红细胞计数情况 15
3.2 中卵泡（150250 μm）周围红细胞计数情况 16
3.3 小卵泡（50150 μm）周围红细胞计数情况 17
第四章 结论与展望 18
参考文献 20
致 谢 24
褪黑素对昼夜节律紊乱小鼠卵巢血管发育的影响
摘 要
卵巢是雌性动物实现生殖功能的重要组织器官，卵巢中卵泡发育提供了雌性动物发情和排卵的生理基础。在哺乳动物卵巢中，卵泡血管分布于卵泡壁外侧的内膜细胞层，为卵泡发育提供营养物质。 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: *351916072* 
卵泡血管的发生随着卵泡发育周期而变化。当今，昼夜节律紊乱在很大程度上影响着人们的生殖健康。褪黑素，作为受光照调控的内源因子，能够在机体内发挥调节生物节律、抗氧化以及调节生殖内分泌激素表达等功能。本研究拟探究褪黑素对昼夜紊乱动物卵巢血管发育的调节作用。试验以5周龄雌性小鼠为研究对象，建立昼夜节律紊乱小鼠模型，并对紊乱组小鼠外源补充褪黑素。通过qRTPCR技术检测分析以及卵巢切片的制作，观察鉴定各组小鼠卵巢血管发育相关基因表达水平以及卵巢血管发育情况。结果发现，褪黑素处理组与紊乱组、对照组与紊乱组之间VEGFR1、VEGFR2、VEGFA基因mRNA的相对表达水平均无显著差异（p > 0.05）；褪黑素处理组、对照组小鼠卵巢中大卵泡周围红细胞数均高于紊乱组，差异极显著（p < 0.01）； 褪黑素处理组小鼠卵巢中小卵泡周围红细胞数与紊乱组之间差异显著（p < 0.05）。综上，褪黑素对昼夜节律紊乱小鼠的卵泡血管发育有改善作用。
引言
卵巢在雌性动物的生殖过程中主要发挥分泌激素和产生卵子的功能。哺乳动物卵泡的发育分为四阶段，即原始卵泡、初级卵泡、次级卵泡和有腔卵泡。在卵巢卵泡的发育过程中，其形态和大小等都会发生一系列变化，期间还伴随着大量血管生成。卵泡周围微血管的作用主要体现在通过血液循环实现物质输送，如维持多种激素、O2和营养物质等供应以及代谢产物的运输。在卵泡发育早期，卵泡中血管就已经开始发育，卵泡鞘膜上的血管会随卵泡的发育进程在数量及大小方面有所增加。有腔卵泡的鞘膜上已经出现血管网，呈网状分布的血管随卵泡的发育不断延伸生长。卵巢血管在优势卵泡的发育过程中更为重要，其鞘膜上微血管系统形成后，还会有一个相对高级的毛细血管网输送更多营养物质以满足卵泡发育的需要。
卵巢中卵泡内的颗粒细胞以及卵泡膜细胞能够分泌血管内皮细胞生长因子（VEGF）， VEGF及其受体在动物卵巢中均有广泛分布。VEGF在动物卵巢中的主要作用是促进卵泡中新血管及血管网的生成，以进一步推进形成卵泡中的微血管系统。同时，研究表明VEGF的表达受机体所分泌的多种激素影响，即多种激素参与调控卵巢血管的生成发育。
哺乳动物体内的褪黑素（MT）的主要合成部位是松果体，此外，多种动物的组织和器官也能够产生褪黑素。褪黑素受体（MTR）在哺乳动物机体的脑、脊髓和肝脏周围的组织器官中均有分布。褪黑素是机体中重要的神经内分泌激素，主要通过参与下丘脑－垂体－性腺轴的调控过程，以调节GnRH、LH及卵泡刺激素（FSH）等多种激素的分泌，进而调节VEGF分泌对小鼠卵巢血管发育的影响。同时，MT还是一种优质的抗氧化剂和自由基清除剂，能够直接参与或间接通过增加抗氧化酶活性、抗氧化物表达量等方式参与活性氧（ROS）的清除过程。同时，褪黑素在机体中还发挥着多方面的生物学功能和作用，例如调节生物节律，增强机体免疫能力等多种生理调节作用。
这些研究均证明了褪黑素与卵巢血管发育有着紧密的联系，但昼夜紊乱对卵巢血管发育的影响以及褪黑素对昼夜紊乱动物卵巢血管发育的影响仍有待研究。在本课题的探究中，我们以昼夜紊乱的雌性CD1小鼠为模型，设置对照组、昼夜紊乱组、昼夜紊乱+褪黑素处理组这三组为试验研究对象，通过qRTPCR技术检测小鼠昼夜紊乱对与小鼠卵巢血管发育相关的VEGFA、VEGFR1、VEGFR2这三个基因mRNA的表达情况，并采用HE染色法制作卵巢切片，通过虚拟显微镜观察卵巢血管发育情况，探索昼夜紊乱对小鼠卵巢血管发育的影响以及褪黑素对昼夜紊乱小鼠卵巢血管发育的影响，为今后褪黑素在卵巢血管中的相关研究提供参考。

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