目录
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摘 要 I
ABSTRACT II
第一章 文献综述 1
引言 1
1 前言 2
2 正文 2
2.1 lncRNA分布、分类、特征及来源 2
2.1.1 分布 2
2.1.2 特征及分类 3
2.2 LncRNA的作用机制 3
2.2.1 LncRNA的表观遗传修饰作用 3
2.2.2 lncRNA对动物生殖生理的作用 4
2.2.3 lncRNA影响SMAD信号转导通路 4
2.3 lncRNA在垂体上的研究进展 4
2.3.1 垂体的重要性 4
2.3.2 lncRNA对于垂体激素分泌的影响 5
2.3.3 lncRNA对不同类型细胞生理活动的影响 5
2.4 lncRNA相关研究目前存在的问题 6
2.4.1 关于lncRNA在繁殖方面的功能研究较少 6
2.4.2 关于垂体细胞内lncRNA的分子调控机制的研究较少 6
2.5 lncRNA的应用前景 6
3 总结 6
4 展望 7
第二章 实验部分 8
1 材料与方法 8
1.1 实验材料及前期准备 8
1.2 干扰RNA、细胞培养及转染 8
1.3提取RNA及测浓度 8
1.4 荧光定量PCR 9
1.5 提取蛋白质 9
1.6 细胞增殖，调亡等指标检测 10
1.6.1 EdU检测细胞增殖 10
1.6.2 AnnexinV FITC/PI双染法检测细胞凋亡 10
1.7 ELISA激素测定 10
1.8 数据处理及分析 10
2 结果与分析 10
2.1 同位点siRNA的干扰效果 10
2.2 lncSM2与SMAD2的靶向关系 11
2.3 干扰lncSM2对垂体细胞增殖的影响 12
2.4 干扰lnc *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: &351916072& 
SM2对垂体细胞调亡的影响 13
2.5 干扰lncSM2对垂体激素促性腺激素表达的影响 13
3 讨论 14
第三章 结论与展望 16
参考文献 17
致 谢 19
LncSM2靶向SMAD2调控绵羊垂体细胞促性腺激素分泌的研究
摘 要
（目的）本课题以湖羊为研究对象，通过干扰lncSM2 ，检测lncSM2与SMAD2靶向结合关系，进一步检测垂体细胞增殖和凋亡指标、促性腺激素的分泌，探究lncRNA调控湖羊垂体细胞激素分泌的影响及分子机制。（方法）实验室前期研究中筛选了高低繁湖羊垂体差异候选 lncRNA，命名为lncSM2，其靶向调控基因 SMAD2。本课题通过体外培养细胞并干扰lncSM2及转染、提取RNA及测浓度、荧光定量PCR、EdU检测法、AnnexinV FITC/PI双染法、ELISA激素测定等方法检测其靶基因 SMAD2 表达变化以及垂体细胞增殖、 凋亡等水平变化，进一步确定 lncSM2 靶向 SMAD2 调控垂体激素的合成与分泌的机制等。（结果）结果表明，体外干扰lncSM2后，其靶基因SMAD2基因和蛋白水平显著下降（P<0.05）；促凋亡BAX蛋白表达量无显著变化，但抑凋亡BCL2蛋白显著下降（P<0.05），BAX/BCL2蛋白表达量显著上调（P<0.05）；增殖相关基因PCNA基因和蛋白水平都显著下调（P<0.05）；LH蛋白/基因表达量显著下调（P<0.05），FSH基因表达量显著下降（P<0.05）。（结论）结果提示，lncSM2与SMAD2基因有靶向关系，体外干扰垂体细胞的lncSM2后，能够下调SMAD2基因的表达，能显著抑制垂体细胞的增殖，促进垂体细胞的调亡，抑制垂体细胞释放FSH及LH。本研究初步证明了lncSM2基因在湖羊垂体中的重要作用，为进一步探索其中的作用机制提供一定的基础。
引言
雌性生殖活动（例如卵泡发育和排卵）主要受下丘脑垂体卵巢轴的激素调节。三者各自合成和分泌下丘脑促性腺激素释放激素，垂体促性腺激素和性腺性激素激素形成激素调节的闭环，所有这些都遵循负反馈调节法则。其中，垂体是体内最复杂，最重要的神经内分泌腺，在调节生殖轴方面起着非常重要的作用。因此，在某种程度上，FSH和LH作为垂体促性腺激素是调节家畜繁殖能力的主要激素。垂体分泌的促性腺激素有两种，促卵泡激素（FSH）和促黄体生成激素（LH），促黄体生成激素（LH）在雄性体内被称为雄激素间质细胞因子激素（ICSH）。 FSH和LH具有协同促进性腺正常发育以及性激素合成和分泌的作用。 FSH作为一种促性腺激素，可刺激卵巢或睾丸中卵或精子的产生。 LH促进雌性排卵，促黄体生成激素和孕酮分泌。在雄性中，它促进雄性基质细胞的发育，并刺激睾丸中雄激素的合成和释放。
lncRNA主要分布在细胞核，胞器与胞质中也有分布（Djebali S et al,2012），细胞基因组DNA可以转录出两种RNA，一种具有翻译功能的叫编码RNA，二种是叫做非编码RNA (noncoding RNA，ncRNA)，其无翻译能力，并且分为多类，例如包括非编码单链RNA（microRNA）、诱导转座子沉默RNA（PIWI interacting RNA，即piRNA）、核仁小分子RNA（small nucleolar RNA）在内的非编码小RNA是小于200nt的；而长链非编码RNA (long noncoding RNA,lncRNA,大于200 nt)则是大于200nt的（Okazaki Y et al,2002）。lncRNA通过多种不同的模式调控细胞遗传信息的传递具有表观遗传修饰作用；lncRNA在雌性动物排卵，黄体形成的早期胚胎发育中可能起重要作用，以及许多研究表明lncRNA也参与了雄性生殖细胞的增殖和分化的调节；lncRNA能够通过把DNA连上甲基，染色质重塑，组蛋白修饰等表观遗传修饰途径影响靶向SMAD基因表达，从而影响整个SMAD信号转导通路，来调控下游基因的表达。

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