目录
摘 要 I
ABSTRACT II
第一章 文献综述 1
1 卵巢颗粒细胞的作用 1
1.1 颗粒细胞和雌激素 1
1.2 颗粒细胞和卵泡发育 1
2 AMPK在卵巢中的调控作用 1
2.1 AMPK和能量代谢 1
2.2 AMPK/mTOR通路 2
3 AMPK对类固醇激素合成的影响 2
3.1 类固醇激素的合成 2
3.2 类固醇激素合成的相关调控基因 3
4 AICAR目前在颗粒细胞中的研究应用 3
第二章 AMPK激活剂对绵羊卵巢颗粒细胞的最佳激活效果筛选 5
1 试验材料 5
1.1 绵羊卵巢的收集 5
1.2 主要试剂与仪器设备 5
2 试验方法 6
2.1 AICAR处理绵羊卵巢颗粒细胞 6
2.2 绵羊卵巢颗粒细胞总RNA的提取及RTqPCR 6
2.3 绵羊卵巢颗粒细胞蛋白的提取及Westernbolt检测方法 6
3 试验结果与分析 7
3.1 AICAR激活剂对绵羊卵巢颗粒细胞中AMPK的最佳激活效果 7
3.2 AICAR激活剂激活后对细胞凋亡的影响 9
4 讨论 11
5 小结 12
第三章 AMPK激活剂对绵羊卵巢颗粒细胞增殖和细胞周期的影响 13
1 材料与方法 13
1.1 主要仪器设备与试剂 13
1.2 AICAR处理绵羊卵巢颗粒细胞 13
1.3 绵羊卵巢颗粒细胞总RNA的提取及RTqPCR 13
1.4 绵羊卵巢颗粒细胞蛋白的提取及Westernbolt检测方法 13
2 试验结果与分析 13
2.1 AICAR激活剂激活后对细胞增殖的影响 13
2.2 AICAR激活剂激活后对细胞周期的影响 14
3 讨论 15
4 小结 16
第四章 AMPK激活剂对绵羊卵巢颗粒细胞类固醇激素的影 *51今日免费论文网|www.51jrft.com +Q: &351916072& 
响 17
1 材料与方法 17
1.1 主要仪器设备与试剂 17
1.2 AICAR处理绵羊卵巢颗粒细胞 17
1.3 绵羊卵巢颗粒细胞总RNA的提取及RTqPCR 17
1.4 绵羊卵巢颗粒细胞蛋白的提取及Westernbolt检测方法 17
2 试验结果与分析 18
2.1 激活剂AICAR对绵羊卵巢颗粒细胞类固醇合成途径相关基因表达的影响 18
3 讨论 19
4 小结 19
第五章 结论与展望 20
1 结论 20
2 展望 20
参考文献 21
附 录 25
致 谢 26
AMPK激活剂对绵羊卵巢颗粒细胞增殖及功能影响的研究
摘 要
【目的】探讨AMPK激活剂（AICAR）对绵羊卵巢颗粒细胞活性及类固醇激素分泌的影响。【方法】对绵羊卵巢颗粒细胞进行体外无血清培养，添加不同浓度的AICAR（0.5mM，1mM，2mM）处理颗粒细胞，不做处理的颗粒细胞为空白对照组，利用RTqPCR、Western blot等技术方法检测AICAR对AMPK的最佳激活浓度。基于AICAR的最佳激活效果浓度检测绵羊卵巢颗粒细胞增殖和类固醇激素合成相关基因和蛋白的表达，用AnnexinV FITC/PI法检测细胞凋亡情况，用PI单染法检测细胞周期变化情况；【结果】1mM AICAR激活剂激活颗粒细胞中AMPK的效果显著高于其他处理组和空白对照组（P<0.05），故选用1mM AICAR作为最佳激活效果浓度。基于此浓度，激活颗粒细胞后和空白对照组相比，AICAR处理组极显著抑制PCNA基因和蛋白的表达（P<0.01），显著促进Bax/Bcl2蛋白的表达（P<0.05），S期细胞比例显著下降，从而阻滞了颗粒细胞从G1期进入S期，抑制颗粒细胞增殖；1mM AICAR激活AMPK后极显著抑制进StAR、3βHSD、CYP11A1、ERA基因的表达（P<0.01），显著抑制StAR和CYP19A1蛋白的相对表达量（P<0.05），极显著抑制CYP11A1和HSD17B12蛋白的相对表达量（P<0.01）。【结论】AMPK激活剂能抑制绵羊卵巢颗粒细胞的增殖，阻滞细胞细胞周期的进程，促进颗粒细胞凋亡，并抑制类固醇激素的分泌。

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