植物儿茶素类化合物及相关代谢物积累特性【字数:7230】
目录
摘要2
关键词2
Abstract2
Key words2
引言(或绪论)2
1材料与方法3
1.1植物材料 3
1.2样品制备与抽取3
1.3色谱条件3
1.3.1数据采集仪器系统3
1.3.2液相条件3
1.3.3质普条件3
1.4代谢物定性、定量和数据分析4
2结果与分析4
2.1代谢产物分析 4
2.2儿茶素类物质分析4
2.3描述性分析5
2.3.1不结球白菜的儿茶素类物质含量变化 5
2.3.2其他代谢物含量变化6
2.3.3儿茶素类和其他代谢物的比较6
2.3.4叶片颜色对儿茶素类积累的影响6
2.3.5相关性分析6
3讨论 8
致谢9
参考文献9
植物儿茶素类化合物及相关代谢物积累特性
引言
引言 不结球白菜是我国长江中下游广泛种植的大众蔬菜,其中含有少量儿茶素类物质。儿茶素是一类多羟基酚,母体由3个环组成,每个环上都连有羟基,化合物不同,羟基的位置和数量也不同[1]。国内外近十多年来大量的科学研究表明,儿茶素类物质具有多种药理活性,可在多种疾病防治过程中发挥重要作用,其具有的抗氧化、抗癌、抑菌消炎、保护心脑血管和防治帕金森痴呆症等许多保健及药理功效,有很高的经济价值。
*景先生毕设|www.jxszl.com +Q: &351916072&
/> 现有对于儿茶素的合成调控的研究可分为两个方向,一是内部因素,如酶对儿茶素合成的影响,有实验验证,桂皮酸—4羟化酶(C4H)是苯丙烷代谢途径酶之一,也是茶树酚类物质合成的关键酶之一[2] 刘亚军等[3]试验表达分析显示,不同发育时期鲜叶中儿茶素和黄酮醇积累规律与C4H基因的表达一致。在不同部位对儿茶素合成的影响试验中,试验结果显示所有的儿茶素主要分布在芽与幼嫩的叶中,而在成熟的叶和茎中的含量较少,根部的儿茶素含量最少,且只检测到了表儿茶素(EC)[4]。除C4H外,二氢黄酮醇还原酶(DFR)也是儿茶素生物合成的关键酶[5],在植物中DFR可以与多种不同羟基二氢黄酮醇结合,如二氢槲皮素(DHQ)等[6]。Mamati等研究结果表明DFR基因表达量与总儿茶素的含量有显著相关性[7]。马春雷[8]的研宄结果与Mamati—致,DFR基因的表达与儿茶素含量具相关性。
另一研究方向则是外界环境因素的影响。有研究报道,反复对茶树悬浮愈伤组织进行光照培养,能够不同程度的增加儿茶素含量,当光照培养三代后,儿茶素的累积量最高可达到125 mg/g[9]。而在另一关于蔗糖与儿茶素的研究中则证明,无论是茶树愈伤组织还是茶树幼苗经过蔗糖处理后,儿茶素含量及组分都有所增加[9]。但蔗糖对于儿茶素积累的促进只表现在一定浓度内对EC和表没食子儿茶素(EGC)积累量的促进,对于脂型儿茶素EGCG的影响则表现为积累量减少,同时蔗糖浓度过高也会使部分儿茶素类物质含量下降。除此之外,激素浓度在一定范围内则与儿茶素的积累呈负相关关系[9]。
从基因控制层面和代谢途径来说,儿茶素类物质合成的起始反应是脱氨反应,该反应是不可逆的,这一步反应的速度影响代谢总体的速度,查尔酮合成酶是儿茶素合成反应中的一个关键酶,它催化形成一个重要的中间产物:查尔酮,其为儿茶素的合成提供基本碳骨架。无色花色素是儿茶素生物合成途径中最后一个中间产物。儿茶素由无色花色素反应从两条途径生成[10]。
本实验研究不结球白菜中儿茶素类的积累特性,着重在于与其他代谢物质间的相关性,主要是花青素、酚胺、香豆素及其衍生物、氨基酸及其衍生物和黄酮类物质与儿茶素类物质代谢的关系,从而探究植物中儿茶素类的积累特性以及不同代谢物间的关系。
1 材料与方法
1.1 试验材料
选取7个品种的不结球白菜种子:‘紫罗兰’、‘苏州青’、‘黄玫瑰’、‘乌塌菜’、‘香青菜’、‘矮脚黄’和‘紫菜薹’。通过温汤浸种法对经过挑选大小基本一致的种子进行消毒,在穴盘播种后,将其转入塑料大棚中,在适温条件下生长至莲座期后取样备用。
1.2样品制备与抽取
将不结球白菜植株分组,选取长势较为均匀的植株作为试验材料,将其真空冷冻干燥。
将冻干的叶子使用研磨仪(MM 400, Retsch)研磨(30 Hz,1.5分钟)成粉末。
取100mg粉末,溶解于1mL提取液中。溶解后的样品4 ℃冰箱过夜,在此期间涡旋三次,提高提取率。
离心(转速10000 g,10分钟),吸取上清,用微孔滤膜(0.22 μm pore size)过滤样品,保存在样瓶中,用于后续LCMS/MS分析。
1.3色谱条件
1.3.1数据采集仪器系统 主要包括:超高效液相色谱(Ultra Performance Liquid Chromatography,UPLC)(Shimpack UFLCSHIMADZU CBM30A,http://www.shimadzu.com.cn/),串联质谱(Tandem mass spectrometry,MS/MS)(Applied Biosystems 6500 QTRAP,http://www.appliedbiosystems.com.cn/)
原文链接:http://www.jxszl.com/swgc/smkx/564186.html
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