有研究表明PacC/Rim101能够调控真菌生长、离子型渗透胁迫、细胞壁完整性和多糖的分泌、分泌蛋白酶类、次级代谢产物的合成等许多生理过程。同时也参与Pal/Rim途径，响应外界pH变化。灵芝（Ganoderma lucidum）作为我国传统的药用大型真菌之一，同时，也是一种白腐真菌，其分泌的漆酶、纤维素酶以及三萜都有着很高的应用价值。我们探究了GlPacC沉默菌株中的发酵液pH、漆酶酶活、纤维素酶活相较于野生型菌株的变化，并希望通过对发酵液pH与其中的漆酶酶活进行连续检测以及进行控制pH的验证实验来探究GlPacC是否通过影响发酵液pH来影响漆酶酶活。但在实际检测中发现了于预期相悖的结果，我们分析可能由于不同菌株间的生物量差异以及所产漆酶性质差异导致了漆酶酶活检测结果不能很好的反应单位菌丝所产生的实际总漆酶酶活。
目录
摘要 1
关键词 1
Abstract 1
Key words 1
引言 2
1 实验材料 3
1.1 实验菌株 3
1.2 主要试剂 3
1.3 培养基 3
2 实验方法 3
2.1 平板生长实验 3
2.2 漆酶显色圈的检测 3
2.3 发酵液中漆酶酶活的检测 3
2.3.1 灵芝培养 3
2.3.2 发酵液中漆酶酶活测定 4
2.3.3 发酵液中蛋白浓度的检测 4
2.4 发酵液pH的检测 4
2.5 纤维素酶活测量 4
3 结果与分析 5
3.1 GlPacC沉默对菌丝生长的影响 5
3.2 平板显色观察比较四个菌株漆酶酶活 5
3.3 GlPacC沉默对漆酶酶活变化的影响 6
3.4 GlPacC沉默对发酵液pH变化的影响 8
3.5 GlPacC沉默对纤维素酶活的影响 9
4 讨论 9
致谢 11
参考文献 12
转录因子PacC对灵芝生长发育影响的研究
生物技术学生 胡达石
引言
灵芝(Gan *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ￥351916072$ 
oderma lucidum)在我国有着悠久药用历史，是中医药学宝库中的珍品，同时也是研究最为深入的药用真菌之一，其众多次级代谢产物拥有广泛的生物活性。因此，对灵芝各种生理活动的研究也有重大的意义。
有研究表明PacC/Rim101在真菌生理活动中具有重要作用，其能够调控真菌生长、离子型渗透胁迫和胞内离子稳态、细胞壁完整性和多糖的分泌、分泌蛋白酶类、病原真菌致病力和毒力、次级代谢产物的合成等许多生理过程[1,2]。例如一些研究发现，PacC/Rim101能够调控PType Na+ ATPase Ena1的表达，绿僵菌（M. robertsii）以及球孢白僵菌（Beauveria bassiana）等菌种在敲除PacC基因后均不能很好地耐受较高浓度的NaCl以及KCl胁迫[3,4]。同时，GlPacC沉默菌株相比于WT与CK菌株对较高浓度的NaCl以及KCl胁迫产生一定的耐受性（Wu et al.2016），因此GlPacC可能通过调节Na+/K+P型ATPase基因的表达影响菌株的酸碱适应性及耐盐性,但在不同菌株中调控方式不尽相同。同时有研究表明，许多致病真菌在敲除PacC基因后由于其调控的一些基因的表达水平受到影响导致生长情况以及毒力均不如野生型菌株。例如PePacC在展青霉素生物合成中的重要作用是通过限制簇中基因的表达，以及通过调控已知的毒力因子葡萄糖氧化酶（PeGOD）和新的毒力因子（例如PeCRT和PeSAT）在介导发病机制中起到作用[5]，而Pal/Rim途径又是真菌中特有的信号途径。这就有利于针对该途径的开发一些特殊的抗真菌药物，能够达到既能够治疗一些真菌引起的动植物疾病，又不会影响到动植物本身的目的。
灵芝分泌的漆酶、纤维素酶等大量胞外酶使得灵芝能够以纤维素和木质素为碳源维持自身生长发育。其中，漆酶作为一种以铜离子为活性中心的多酚氧化酶，适宜反应温度较低，并且有着广泛的底物专一性，具有高效环保的特点，在造纸工业、环境保护、食品生产、在木材行业、生物饲料开发、生物检测等方面都具有广阔的应用前景和商业价值[6,7]，真菌漆酶又是目前极有潜力应用于实际工业生产的漆酶[8]。有研究表明，GlPacC沉默菌株发酵液中漆酶的酶活高于野生型菌株（Wu et al.2016）。因此，研究GlPacC在调控漆酶合成过程中的调控机理有助于开发新的高效的漆酶来源。同时有研究发现，可以利用小麦秸秆作为灵芝生长的半固体基质，在控制pH为5时能够获得产量更高的漆酶[9]。
自然界中各种环境的变化会影响微生物的生长，但微生物也在不断地进化中产生很多机制来适应环境的变化。例如在真菌中至少有三条途径来响应影响到其吸收营养物质、维持细胞膜电势和蛋白功能等的外界pH变化，分别为钙信号途径、依赖于MDS3的调控途径和Pal/Rim途径[10]。其中，Pal/Rim在真菌适应外界环境pH变化过程中起到重要作用[1]。真菌感受外界环境pH变化后，通过Pal/Rim途径传递信号并激活下游的转录因子PacC/Rim101，然后PacC/Rim101通过激活或抑制一系列基因的表达，最终使真菌适应外界pH环境[11]。同时，PacC/Rim101会受到外界中性和碱性pH的诱导表达。例如BcpacC沉默菌株生长和毒力的改变情况取决于培养基或宿主组织的pH[12]。除此以外，PacC基因还有很多调控其他方面的生理活动的功能，这些功能在不同物种中并不完全相同。由于灵芝在液体发酵培养时具有酸化发酵液的能力，因此，我们希望考察PacC/Rim101是否会影响灵芝酸化发酵液的能力，同时也探究PacC/Rim101是否通过激活或抑制某些基因的表达影响灵芝酸化发酵液的能力使得其改变外界环境pH的能力改变，从而影响其分泌的漆酶酶活。
1 实验材料
1.1 实验菌株
WT、CK菌株、GlPacC沉默菌株（实验室已分离筛选获得）
1.2 主要试剂

原文链接：http://www.jxszl.com/swgc/smkx/563658.html