建立一种超高效液相-质谱串联法（UPLC-MS）快速测定植物样品中茉莉酸、水杨酸、脱落酸、赤霉酸、吲哚乙酸、异戊烯腺嘌呤、玉米素核苷、玉米素、独脚金内酯和茉莉酸甲酯10种植物激素含量的检测方法。采用2.1×100 mm ACQUITY UPLC BEH C18柱为色谱柱，以0.1％甲酸-2mM醋酸铵溶液/2mM醋酸铵溶液和甲醇溶液为流动相，进行梯度洗脱，分别在正负离子模式下进行分析检测。基于植物激素的保留时间、分子离子峰的质量数、和碎片离子峰的质量数进行筛查分析。10种目标检测物在范围内线性关系良好，检出限为0.05-2μg/L。在使用外标法定量的情况下，添加回收率为68.9%-106.9%，相对标准偏差为0.2%-13.2%。该处理方法较为简单易行，适用实验室大批量处理植物样品。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言1
1材料与方法2
1.1试剂 2
1.2仪器与设备2
1.3实验方法2
1.3.1 标准溶液储备液的配置2
1.3.2样品前处理3
1.3.3 SPE柱使用方法3
1.3.4液相色谱条件3
1.3.5质谱条件3
2结果与讨论3
2.1色谱条件的选择及优化3
2.2 10种植物激素标准品的测定4
2.3 线性关系、检出限和定量限6
2.4前处理方法的优化7
2.2.1提取剂优化7
2.2.2提取方式优化7
2.2.3除杂和富集优化7
2.5加标回收率实验8
2.6样品内源激素测定9
2.7 讨论9
3结论 9
致谢10
参考文献10超高效液相高分辨率质谱联用测定植物激素方法的优化
引言
植物内源激素是植物自身代谢合成的一类可以调节植物生长发育的化合物，它们一般为小分子物质，现在主要分为生长素（IAA）、赤霉素(GA3)、细胞分裂素(CTK)、脱落酸(ABA)、乙烯(Eth)和油菜素甾醇（BRs） *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: *351916072* 
六大类[1]。生长素和细胞分裂素主要控制细胞分化、杆的伸长，髓细胞的增值和芽的分化。赤霉素和生长素可以协同控制茎的伸长和植物的单性结果。脱落酸和乙烯则控制植物各个部位的脱落和气孔的张开[24]。各种激素协同调控，在极低的浓度下就可以对植物的生理过程产生影响，控制植物的基因表达、生长发育和对逆境的反应[5]。水杨酸、茉莉酸[6]和独脚金内酯[7]等虽然未被正式列在植物内源激素分类中，但是它们与植物内源激素一样影响着植物的生长发育过程，是近年来植物来源激素的研究重点。定性定量分析这些植物激素对于了解植物激素作用机制，进一步开发利用植物激素方面有很大的帮助。
植物激素定性定量分析常用方法有三大类：生物检测技术、理化检测技术和免疫测定技术。生物测定法方法复杂、准确性和专一性均不高[8]，单一使用已经不能满足现代植物研究的定量分析要求。但此种方法可以有效地从合成物中筛选出植物生长调节剂，仍然可应用于植物激素的定性分析[9],也有报道其与理化方法联用可准确地定量分析植物激素含量[10]。理化方法中，常用方法主要是高效液相色谱（HPLC），气质联用(GCMS)和液质联用(LCMS) 等。色谱法可以定量分析植物激素含量，质谱法则可以对测定物进行定性分析，反映了测定地准确性。气质联用分析是一种准确、可靠的手段，其灵敏度和选择性均较高，但需要通过较为复杂的衍生化办法处理样品。液质联用虽然敏度和精确度没有气质联用高，但省略了复杂的衍生过程，只需简单的前处理即可。免疫学方法中，酶联免疫法因其简便、快速、专一和精确的特点，被广泛运用在除乙烯外的植物激素测定上[11]。
植物激素的测定有三个主要难点，植物激素含量较低，易受外界影响分解，样品含有复杂的基质。植物激素一般水平为ng/g级 ,如IAA 1100 ng/g鲜重, GA3 11000ng/g鲜重，ABA 104000 ng/g鲜重[12]。温度、PH变化和光照都会改变植物激素的稳定性，促进植物激素分解。植物样品中，基质成分复杂，包括色素和多酚等物质，提取过程中会提取出较多的干扰植物激素鉴定的物质。因此，植物激素测定前必须对植物样品进行合适的前处理。前处理的主要目标是干扰测定的物质的去除和痕量植物激素的富集，选择适宜的前处理方法，能够提升色谱分析的准确性和精密度。
目前针对植物样品，已经发展出了许多富集和净化技术，如固相萃取(SPE)，液液萃取(LLE)，固相微萃取(SPME)和分子印迹萃取(MISPE)等。
本实验采用超高效液相质谱联用法，汇总了包含茉莉酸、水杨酸、脱落酸、赤霉酸、吲哚乙酸、异戊烯腺嘌呤、玉米素核苷、玉米素、独脚内酯和茉莉酸甲酯的离子化模式、母离子精确质量、子离子（特征碎片离子）精确质量和保留时间的数据，以水稻、烟草、棉花、番茄、小麦、拟南芥等植物材料作为研究对象，重点优化了植物样品前处理方法，从而建立一种适用于多数植物样品的灵敏度高、高效、快速的植物激素定性和定量检测方法。
材料与方法
试剂
甲醇，异丙醇，乙腈，醋酸铵，甲酸（色谱纯）
丙酮（分析纯）
标准品：茉莉酸，水杨酸，脱落酸，赤霉酸，吲哚乙酸，异戊烯，腺嘌呤玉米素核苷，玉米素，独脚金内酯，茉莉酸甲酯
实验室用超纯水（MilliQ）
1.2 仪器与设备
高效液相色谱串联质谱联用仪（G2XS QTof, Waters）
低温离心机（Heraeus Fresco 21 ,Thermo）
超声波清洗机（Mechanical Ultrasonic Cleaner With Time Control， Beijing Ultrasonic）
真空离心浓缩仪（Integrated SpeedVac Kits,Thermo）
涡旋混匀器（VortexGenie 2，Scientific Industries）
固相萃取柱（Oasis HLB 3 cc Vac Cartridge, 30 mg Sorbent per Cartridge, 60 µm Particle Size，Waters）
1.3实验方法

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