摘 要 1摘 要烟草青枯病是由茄科劳尔氏菌（本文中称其青枯菌）感染引起的一种土传细菌性植物病害，目前主要的防治方法都有其局限性，其中生物防治技术虽然见效较慢，但因其绿色、安全的特点，具有一定的应用前景。本实验即是利用粘细菌Myxococcus sp.BS对青枯菌的捕食特性，将粘细菌BS作用于被青枯菌感染的烟草苗上，并与农用链霉素处理的烟草苗相比较，定期观察统计烟草发病情况，实测每个处理组烟草生物量，并进一步研制出以BS菌为生防菌的生物有机肥应用于田间烟草栽培。平板捕食实验结果表明，粘细菌BS对青枯菌有良好的捕食作用，且加入粘细菌后的青枯菌残留数明显少于加入农用链霉素；温室抗病试验的结果表明，粘细菌BS处理后的烟草苗长势和生物量都明显优于加入链霉素的处理，因此，相较于农用链霉素，粘细菌BS对青枯菌有更好的捕食效果，对被青枯菌感染的烟草苗施入粘细菌后有一定的防治效果，利用粘细菌BS防治烟草青枯病在生防领域有一定的应用前景。
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引言
引言
烟草在我国各个省份都有栽培，是具有很高经济效益的作物[1]。烟草在生长的过程中很容易被病原菌或害虫感染从而出现生长不良的情况，生产出来的烟叶品质和质量都会下降，使烟草种植户的经济受到损失。在众多的烟草病害中，最常见也危害最大的是烟草青枯病，它是一种细菌性病害，由茄科劳尔氏菌（本文中称其青枯菌）引起，青枯菌是一种通过土壤传播的病原性细菌，致病力强，可以感染很多植物，在土壤中广泛分布。烟草青枯病的典型症状是叶片枯萎后却呈现出绿色而非黄色，因此称其为“青枯病”。该病在我国长江流域及其南部的烟草种植区域都普遍发生，其中安徽省皖南烟区局部地块发病面积较大、危害较重，尤其是砂质水田发病率较高，严重时可使全田烟草死亡，因此烟草青枯病的防治研究具有重要的现实意义[2]。
目前对烟草青枯病的防治主要有三种方法，但每一种都有其不足之处：化学农药对生态危害较大，施入田中后易产生残留，危害到该区域的动物植物，且易诱发病原细菌产生抗药性；抗病育种工作难度大，因为病原菌分化变异速度快，生理小种众多，由此导致植株抗病性状不稳定；生物防治技术利用微生物间的相互作用实现对病原菌的控制，它虽然没有化学农药起效快，但是对环境的污染性几乎为零、不会危害到所在环境内的动植物、一旦作用于植物其保持的效果较久 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: #351916072# 
、可以对病原菌产生特异性杀伤、和其他的防治措施配合作用效果更好等优点，具有广阔的发展前景[3,4]。
在对于虫害或动物病害的生物防治中，主要的研究方向和机制是利用捕食与被捕食的关系对病虫害进行防治[5]。微生物中也存在一些捕食者，例如粘细菌，它对很多细菌及真菌都具有捕食作用。这几年来，人们对于微生物捕食者的捕食作用有了越来越多的关注和研究，微生物捕食者作为生防菌具有很大的潜力[6,7]。粘细菌是一类高等的原核生物，它具有复杂的多细胞社会性行为，能够在固体表面滑行，通过群体协作的方式实现对细菌捕食。粘细菌常年定居于土壤中，抗逆性强，若条件恶劣它可以通过粘孢子存活，这些特点也是它作为生防菌的优势[8]。由于真菌是最常见的植物病原微生物，所以目前对粘细菌在植物病害的防治研究主要集中在植物病原真菌方面[9]。事实上，粘细菌对细菌的捕食和拮抗效果更显著，因此粘细菌在防治植物细菌性病害的应用具有巨大的潜能。本实验将保存的对烟草青枯菌具有良好捕食特性的生防粘细菌Myxococcus sp. BS应用于烟草青枯病的生物防治研究。
本试验研究了生防菌BS对烟草青枯菌的抑制效果，并将BS菌应用到被青枯菌感染的烟草苗上，定期观察统计烟草发病情况，实测每个处理组烟草生物量，对烟草青枯病防治效果评价，进一步研制出以BS为生防菌的生物有机肥应用于田间烟草栽培，以期对烟草青枯病的生物防治提供一些思路，用以指导皖南烟区的烟草生产。
1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 培养基配方
VY/4 培养基：CaCl22H2O 0.1%，安琪酵母 0.25%，琼脂粉 1.5%，pH= 7.2；
LBS培养基: 蛋白胨0.1%，酵母粉0.5%，可溶性淀粉0.7%， MgSO40.1%，pH= 7.2;
3）LB培养基 (gL1)：胰蛋白胨 10.0，酵母粉5.0，NaCl 10.0，琼脂粉15g,pH=7；
4）YGPA培养基：蛋白胨5g，葡萄糖10g，酵母浸粉5g，pH=7.0；
5）烘干兔粪
1.1.2 供试菌株及种子
1)供试烟草品种为云烟97，种子由玉溪中烟种子有限责任公司提供。
2)粘细菌Myxococcus sp. BS(本实验保存),大学农业部环境微生物重点实验室分离到的一株具有自主知识产权的微生物菌株；
1.1.3 试验仪器
仪器名称与型号：电子天平（YP402N）、 pH计（QHAUS SC310）、恒温培养箱（SHP100）、烘箱（SPX150C）、超净工作台（SWCJ2G）、恒温摇床（TY80S）。
1.2 测定方法
1.2.1供试菌株的活化培养
1）粘细菌BS的活化培养：将甘油保藏的粘细菌BS菌株穿刺接种在VY/4固体培养基上，菌落接种处添加灭菌兔粪诱导，30℃培养2到3天至菌落扩散，用接种环刮取部分扩散的菌落转接到新的VY/4固体培养基上活化一次，30℃温箱内培养2到3天；
2）烟草青枯菌的活化培养：在YGPA固体培养基上接种青枯菌，以三区划线方式分离纯化，30℃温箱内培养1到2天至菌落扩散生长，挑选单菌落，转接至YGPA液体培养基摇菌扩繁，30℃温箱内培养12h。
1.2.2菌悬液制备
1）青枯菌悬液制备：在YGPA固体培养基上用接种环挑取烟草青枯菌单菌落，接种于5mL灭菌后的YGPA培液体培养基的试管中，30℃摇菌过夜培养，制成种子液，接着将种子液以1%的接种量接种于100mL的YGPA液体培养基中，在30℃，180rpm摇床培养 2天后, 以8000rpm离心10min，收集沉淀，然后加入无菌水重悬，使用显微镜血球计数板法计算菌体浓度，稀释到浓度108cfu/mL，备用。
2）BS菌悬液制备：将诱导活化后的菌株BS接种到5mL灭菌LBS液体培养基试管中，30℃培养 1到2 天，待试管中细菌贴壁生长后以1%的接种量接种于100mL的LBS液体培养基中，在30℃，180r/min摇床培养 2天。由于粘细菌BS在生长的过程易聚集难以分散，导致无法准确确定其菌体密度，因此采取离心收集菌体通过测定菌体鲜重，用无菌水重悬，最终确定菌悬液中菌体的浓度为0.005g/ml,备用。

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