大豆是我国主要的粮食作物之一，其所含营养全面，蛋白质含量相当丰富。大豆百粒重作为大豆重要的育种目标性状之一，研究其QTL位点并进行验证与定位能为之后的QTL精细定位和图位克隆奠定基础。野生大豆作为栽培大豆的祖先，利用野生大豆可以拓宽后者的遗传基础。前期以NN1138-2为受体，野生豆N24852为供体经多代回交和自交结合分子标记辅助选择构建了一套覆盖野生大豆整个染色体组的染色体片段代换系群体SojaCSSLP1,后经改良形成SojaCSSLP2。本研究选择了一个携带有q100SW11.1野生等位变异的染色体片段代换系CSSL2599，与轮回亲本NN1138-2杂交，构建了一套次级F2:3群体CL2599BDP。对次级群体进行基因型分析，得出野生片段sat_272-sat_270-sat_411携带有控制大豆百粒重的位点q100SW11.1。本研究结果为q100SW11.1的精细定位和图位克隆奠定了基础。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words 1
引言2
1 材料与方法3
1.1 材料3
1.2 试验设计3
1.3 大豆百粒重表型测定3
1.4 大豆百粒重初定位步骤3
1.4.1 DNA提取3
1.4.2 PCR扩增4
1.4.2.1 引物设计4
1.4.2.2 PCR步骤4
1.4.2.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳4
1.4.3 大豆百粒重位点定位4
2 结果分析4
2.1亲本及其衍生的次级群体百粒重表现4
2.1.1 CSSL2955与NN11382百粒重及基因型差异4
2.1.2次级群体CL2955BDP百粒重表现5
2.2 大豆百粒重QTL定位及验证6
2.3不同基因型的亲本百粒重分析7
3 讨论7
3.1作图群体与QTL定位7
3.2 野生大豆染色体片段代换系精细定位的优势8
3.3 试验前景8
3.4 结论9
致谢9
 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: @351916072@ 
参考文献9
野生大豆百粒重QTL定位的研究
引言
大豆[Glycine max（L.）Merrill]是我国主要的粮食作物之一，具有丰富的植物蛋白和植物油脂[1]。从生产上来看，大豆在我国位于第五大粮食作物，播种的面积仅次于玉米、稻谷、小麦、马铃薯。从大豆消费来看，我国大豆消费量居世界第一位，2017年里，我国消费大豆油1740万吨，占全球消费总量的30.9%；消费豆粕7407万吨，占全球消费总量的31.7%。并且大豆是非常重要的战略物资。现如今，大豆在全世界范围内有大面积的种植，我国对大豆有很高的需求量，但我国目前的大豆产业状况不佳，大部分大豆依托于国外进口，而这将会为我国的发展留下巨大隐患，所以培育出高产优质多抗的大豆品种已成为必然趋势[2]。野生大豆是栽培大豆的野生祖先，与栽培大豆相比，野生大豆在丰产性、高蛋白和抗性等多个方面表现良好[3]，且野生大豆百粒重与栽培大豆百粒重之间呈极显著差异，野生大豆百粒重最小可达0.5g，而栽培大豆百粒重最大约55.0g，在这其中包含了丰富的遗传变异信息。董英山等[4]、赵洪锟等[5] 、李向华等[6] 和范虎等[7]，对野生大豆遗传多样性进行分析发现，野生大豆较栽培大豆具有更加丰富的遗传多样性。同时，野生大豆与栽培大豆是近缘品种，两者之间没有生殖隔离，可通过互相杂交，充分研究利用野生大豆的遗传多样性，拓宽栽培大豆的遗传基础。
得益于野生大豆优异的多样性，我国许多学者开始对其不同表型性状进行QTL位点的定位，如阚贵珍等[8]，宁海龙等[9]，陈静静等[10]，孙小利等[11]，分别对野生大豆的单株产量，种子硬实，主茎节数等性状进行分析，定位了诸多QTL位点，丰富了大豆遗传信息，为后续精细定位与图为克隆奠定基础。
大豆百粒重，是大豆重要的产量组分，它属于一种数量性状，表现出广泛的变异范围。百粒重受多基因控制，其受不同遗传背景和环境的影响，年际间波动较大，前人对此做了许多的定位研究。Snape等[12]利用两个早熟大豆品种通过杂交，得到含有82个个体的F2 群体，并利用113个SSR标记，6个RAPD标记，1个RFLO标记构建连锁图谱，共在第1、7、10、13、17、18、19、20号染色体上共鉴定出25个与百粒重相关的位点，其中有8个标记可解释55%的变异。Liu等[13]利用所构建的RILs群体，通过测序共得到47472个SNP,利用这47472个SNP共划分出1126个bin标记进行QTL定位。共定位到47个与产量相关的性状，其中有四个与百粒重显著相关，分别位于15号染色体和19号染色体。Safiullah等[14]利用其实验室构建的两个RIL群体，分别利用SSR分子标记和SNP分子标记构建连锁图谱，共鉴定出4个与百粒重相关的位点，分别位于第1、6、19号染色体上，同时，在6号染色体上的百粒重位点，也鉴定到了蛋白和油脂的QTL位点。
染色体片段代换系（CSSLs）携带有供体亲本单个或几个染色体片段，是用于目标性状检测和定位的理想材料。通过将供体和受体之间杂交，再将其与受体进行多代回交，结合分子标记对后代进行选择，以此得到以供体亲本为背景的单插入片段的家系。利用这种次级作图群体尤其适合QTL验证与定位，如：陈庆山等[15]以野生大豆 ZYD00006 和绥农14 构建的 BC3F3代染色体片段代换系（CSSL）为材料，利用基于单标记扫描的方差分析方法定位大豆百粒重相关位点；利用次级作图群体，为解决“背景噪音”这一难题找到了理想途径。目前已经在许多作物上有广泛的应用，如：水稻[16]、油菜[17]、黄瓜[18]、大豆[19]、番茄[20]、小麦[21]、玉米[22]、棉花[23]、花生[24]、甘蓝[25]等。
关于大豆QTL定位的方法目前已发展了许多种，如单标记分析，通过假设测验、方差分析、回归分析或似然比检验，比较单个标记基因型数量性状均值的差异，如果存在显著差异，则说明控制该数量性状的QTL与标记连锁；单标记分析目前存在些许问题：1.不能识别标记是同一个还是多个QTL连锁；2.不能估计标记和QTL之间的重组率；3.容易出现假阳性；4.功效较低，需要较多的个体观测值。区间作图法，是一种以连锁图谱上两个相互侧邻的遗传标记为基础的一种方法，基于完整的分子标记连锁图谱，计算LOD值，如果LOD曲线大于显著临界值，其所对应的染色体位置就是QTL存在可能性最大的位置。复合区间作图法，是一种针对区间作图法中的缺点并作出改进的一种方法。混合线性模型方法，此方法基于复合区间作图法，可以分析复杂的遗传模型，进行多环境下的联合QTL定位分析，可以大大提高所建立的QTL遗传图谱的精度和效率[26]。

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