小麦种子的真实性与纯度是小麦种子质量的一个重要衡量指标。准确鉴定小麦种子的真实性与纯度，对于提高农作物的产量与品质等具有重大意义。目前小麦种子纯度测定存在四大类不同的测定方法传统鉴定法、物理化学鉴定法、分子生物学鉴定法、生物指纹图谱鉴定法。本文主要基于过往各种小麦种子纯度鉴定的基础，利用A-PAGE凝胶蛋白电泳来鉴定小麦种子的纯度。通过对P10697和P10698两个品种的小麦各取50单粒进行醇溶蛋白凝胶电泳，将得到的图谱进行差异性分析，得到两个品种小麦的纯度鉴定皆为100%，证明了用SDS-PAGE凝胶电泳对小麦种子进行纯度鉴定分析是可行的。
目录
摘要1
关键词1
Abstract1
Key words1
引言（或绪论）1
1材料与方法2
1.1材料 2
1.2试验方法 3
1.2.1醇溶蛋白的提3
1.2.2凝胶制备3
1.2.3加样3
1.2.4电泳3
1.2.5染色及照相保存3
1.3 Rf值计算方法3
2结果与分析3
2.1小麦种子醇溶蛋白凝胶电3
2.2小麦种子纯度鉴定4
3讨论4
致谢8
参考文献9
蛋白电泳在小麦纯度鉴定中的应用
种子科学与工程 李宁
引言
种子纯度及真实性是评价小麦种子质量的重要指标之一，国家标准规定小麦良种的纯度应达到 99%［1］。种子质量的主要指标包括纯度、净度、水分和发芽率这四项，其中纯度是最重要的，直接影响农作物的产量和农民的收入［2］。因此，对于种子纯度的检测是必要的。种子纯度是品种个体与个体之间在特征特性方面典型一致的程度，用本品种的种子数(或株、穗数)占供检验本作物样品数的百分率表示。在繁育小麦种子时，检测种子纯度能预防种子混杂退化，提高种子的播种品质，并能延长种子的使用年限，让种子的一些优良特性能充分发挥出来。种子质量的优劣可以通过种子纯度的高低反应出来。种子纯度降低，会导致农作物的产量下降，并影响种子的品质。据报道，在小麦中，纯度为90%的种子比纯度为99.8%种子 *景先生毕设|www.jxszl.com +Q: ￥351916072￥ 
减产14.3%，每666.7m2减产62 Kg[3]。因此，在种子生产过程中，品种纯度鉴定是不可或缺的一环，它是农作物高产、稳产、优质的保障。
目前存在几大类不同的测定方法：常规鉴定法（如籽粒形态鉴定、种苗形态鉴定、植株鉴定）、物理化学鉴定法（如荧光测定、苯酚染色法）、分子生物学方法（如RAPD技术、RFLP技术、AFLP技术、SSR技术、ISSR技术、SNP技术）、生物指纹图谱鉴定法（如同工酶电泳指纹图谱、麦谷蛋白SDSPAGE指纹图谱、醇溶蛋白APAGE电泳指纹图谱）。各种方法都有各自的局限性，如苯酚染色法鉴定小麦种子纯度染色结果目前在国内只规定了5种，现有小麦品种众多，难免会出现颜色相近的两个或多个品种，在这种情况下就很难区分出异种子了。
鉴于这种情况，近几年蛋白电泳在鉴定小麦种子纯度方面有了较快发展。与常规的鉴定方法相比，醇溶蛋白酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术具有方便易操作、鉴定准确、胶图简单易懂等优点，对于室内鉴定小麦种子纯度更有优势。醇溶蛋白是植物种子储存蛋白的组成成分之一，发现于小麦和玉米中。麦醇溶蛋白约占籽粒总蛋白的43%，是一种小分子单体蛋白，分子量约3000070000道尔顿，它在组成上呈高度的异质性和复杂性，蛋白图谱呈等显性遗传，它的组成成分不受发育时期的生理条件及外界环境因素的影响。所以常被用于小麦的种子纯度鉴定、品质改良、品种分类、遗传多样性研究、预测杂种优势等生产和科研中[4]，这也使得更多人去研究拓展麦醇溶蛋白在小麦生产和科研中的应用。
小麦种子中的醇溶蛋白经蛋白提取液提取后,可用PH为3.2的聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）进行分离。其电泳所出现的蛋白质谱带类型，与同品种的遗传组成有关,并可作为品种的“指纹”， 即为鉴定品种的生化性状。麦醇溶蛋白电泳可分离显示大概40条谱带，具有良好的多态性。所以，可以用 “品种指纹”来分析小麦真实性及品种纯度。我国已建立起一套比较完整的蛋白质电泳技术体系并在水稻[67] 、玉米 [79] 、大麦[1011] 、小麦[1214] 、棉花[15]等多种作物的品种鉴定和种质资源研究上广泛应用。小麦种子醇溶蛋白和玉米种子盐溶蛋白的品种纯度鉴定方法已列入中华人民共和国农作物种子检验规程(GB/T3543.51995)和农业部行业标准(NY/T4992001)。本次实验利用小麦P10697、P10698两个品种各50粒种子来验证APAGE凝胶电泳鉴定小麦种子纯度的可行性。
1 材料与方法
1. 1 材料
1. 1. 1 供试材料。
小麦P10697、P10698各50粒，均由麻浩教授课题组提供。
1. 2 仪器
垂直板型电泳槽；玻璃板；样品梳；直流稳压电源；50、100和1000μL移液枪；玻璃板；玻璃棒；水浴锅；染色槽；烧杯；胶头滴管；1.5mL离心管；离心机；研钵。
1. 1. 3 主要试剂
（1）电极缓冲液（10×）：称取Tris 15.15g, 甘氨酸72.0g, SDS 5.0g, 用去离子水溶解后调PH至8.3，最后定容至500mL。
（2）分离胶缓冲液(4×)：称取 Tris 90.85g,SDS 2.0g，用去离子水溶解后调PH至8.8，最后定容至500mL。
（3）浓缩胶缓冲液(4×)：称取Tris 30.3g,SDS 2.0g,用去离子水溶解后调PH至6.8，最后定容至500mL。
（4）30% 单体贮备液：称取丙烯酰胺（Acr）150g及N，N’甲叉双丙烯酰胺（Bis）04g，溶于去离子水中，后用去离子水定容至500ml，过滤后置棕色试剂瓶中，4℃保存。
（5）10%TEMED直接使用。
（6）10%过硫酸铵（AP）：0.1g过硫酸铵溶于1mL去离子水中。该溶液需使用前新鲜配制。
（7）染色液：称取0.5g考马斯亮蓝R250，加入125mL 甲醇溶液和50mL乙酸，定容至500mL，抽滤后置棕色试剂瓶中。
（8）固定液：称取50g三氯醋酸，加入纯水定容至500mL。
（9）蛋白提取液：称取Tris 0.6g,SDS 1.0g,加入12.5mL甘油和少量去离子水，充分溶解后用盐酸调PH至8.0，再加溴酚蓝0.05g后定容至50mL,最后加入β巯基乙醇2.5mL，混匀后放入20℃冰箱保存。

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